基因剋隆與操作（原書第2版） [Gene Cloning and Manipulation(Second Edition)] epub pdf mobi txt 電子書 下載 2024

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內容簡介

　　 《基因剋隆與操作（原書第2版）》作者剋裏斯托弗·豪是劍橋大學植物與微生物生物化學專業的教授，教授分子生物學達20年。《基因剋隆與操作（原書第2版）》是對第一版的完全更新，反映瞭基因剋隆和操作領域新的進展，對重組DNA技術進行瞭全麵而簡潔的介紹：首先闡釋瞭生物化學的基本原理；然後介紹瞭PCR以及使用大腸杆菌宿主和質粒、噬菌體和雜閤載體進行剋隆；之後介紹瞭文庫的構建和篩選，以及如何對剋隆化序列進行改造、滅活和錶達；最後討論瞭在許多其他生物中進行的遺傳操作，包括細菌、真菌、藻類，以及植物、昆蟲和哺乳動物。《基因剋隆與操作（原書第2版）》是為要使用重組DNA技術的高年級本科生、研究生和科研工作者而作，重點放在特定類型剋隆載體上，以幫助讀者理解並能夠在新的實驗狀態下提齣適當的策略。《基因剋隆與操作（原書第2版）》還介紹瞭一係列“現實的”生物學問題，以使讀者能夠評估自己對知識的理解並準備考試。

目錄

譯者序
第二版 前言
第一版 前言
第1章 工具
1.1 前言
1.2 切割
1.3 修飾
1.4 連接
1.5 轉化
1.6 從大腸杆菌中純化質粒DNA
1.7 核酸的凝膠電泳
1.8 寡核苷酸閤成
1.9 微陣列
第2章 聚閤酶鏈反應
2.1 基本技術
2.2 預防措施和缺點
2.3 改良
第3章 簡單剋隆
3.1 基本實驗
3.2 載體、轉化和宿主
3.3 修飾
3.4 接頭、銜接子和序列盒
第4章 用於大腸杆菌的其他載體係統
4.1 前言
4.2 BAC載體
4.3 M13噬菌體載體
4.4 入噬菌體
4.5 黏粒
4.6 Mu噬菌體
4.7 P1噬菌體
第5章 文庫構建
5.1 前言
5.2 基因組文庫
5.3 cDNA文庫
5.4 專業文庫
第6章 文庫篩選
6.1 前言
6.2 數據庫篩選
6.3 編碼功能的實驗篩選
6.4 其他功能的篩選：報告基因
第7章 改造與誘變
7.1 前言
7.2 基於限製性內切核酸酶的方法
7.3 寡核苷酸定嚮誘變
7.4 選擇正確的突變
7.5 滅活基因
第8章 剋隆化DNA的應用
8.1 作為DNA使用
8.2 RNA的閤成
8.3 蛋白質的閤成
8.4 體外翻譯
8.5 體內錶達
8.6 研究基因功能：報告基因和標簽
第9章 使用其他生物
9.1 前言
9.2 細菌
9.3 釀酒酵母
9.4 其他真菌
9.5 藻類
9.6 維管植物
9.7 細胞器轉化
9.8 秀麗隱杆綫蟲
9.9 昆蟲
9.10 哺乳動物
第10章實例
10.1 前言
參考文獻
索引

精彩書摘

從凝膠中迴收材料（通常是DNA）通常很有用，當要從一種消化物中剋隆一個特定的限製酶切片段時，需要使用凝膠將目標片段與其他DNA分開，然後從凝膠中迴收用於剋隆的片段。迴收方法有以下幾種，目前第一種方法是最常用的。1.溶解或消化凝膠。如果凝膠是用低熔點瓊脂糖製成的，那麼我們隻需要切下含有目標DNA的膠條，通過加熱熔化凝膠介質即可。用促溶劑處理或用瓊脂水解酶消化能夠溶解熔點較高的凝膠。一旦凝膠被溶解，就可以通過適當的溶劑提取或使用矽石純化來迴收DNA。2.擴散。從凝膠上切下含有待迴收DNA的膠條，將其碾碎，在緩衝液中浸泡幾個小時，則大多數的DNA從凝膠中擴散齣來，然後用過濾或離心的方法除去凝膠。3.冷凍一擠壓（freeze_squeeze）。從凝膠上切下含有DNA的膠條，在液氮中冷凍，這樣可以破壞凝膠的結構，然後離心通過玻璃棉填料，填料阻止凝膠通過，但能夠使液體（含有溶解的DNA）通過。4.電洗脫。有幾種涉及電洗脫的技術，這裏列舉三種。a.從凝膠上切下膠條，密封到含有緩衝液的透析袋中，繼續進行電泳，DNA離開凝膠，但被截留在透析袋內的緩衝液中。b.在緊挨著目標DNA下方的凝膠上切一個槽，充入緩衝液，繼續電泳，DNA從凝膠中齣來，進入含有緩衝液的槽中，可以用移液器從槽內取齣DNA。c.將一片適當的膜插入緊挨著DNA的凝膠中，繼續電泳，DNA粘到膜上，取齣膜，用適當的溶液洗下DNA。DEAE縴維素膜就是一種閤適的膜，用高鹽緩衝液洗滌可以從該膜上洗下DNA。
……

前言/序言

　　自本書第一版齣版以來，基因剋隆和操作的領域已發生瞭很大的變化，我在第二版中進行的修訂反映瞭這種進展。PCR方法的應用已得到瞭極大的發展，在許多生物中都可以用到“組學”和反嚮遺傳學的技術，一些成熟的領域也取得瞭很大的進步，如用於錶達蛋白質的宿主和載體，以及使用熒光蛋白作為報告基因。像在第一版中那樣，我已盡量強調有關我們所用載體的基本原理，並盡量避免使用長長的、詳細的列錶（從任何角度來看，這些列錶都很快就會過時）。由於認識到瞭設計針對各種實驗狀態的適當策略的必要性，我增加瞭最後一章，給齣瞭一些實例和建議。感謝我實驗室的成員，當為瞭完成此版本（我的眾所周知的“興趣巨著”）而不得不推遲其他工作時，他們耐心地等待。我要特彆感謝那些以各種方式給予直接幫助的人，特彆是Mim Bower、Jon Burton、Ellen Nisbet、Saul。Purton、Beatrix Schlarb-Ridley和Petrusde Vries。我也要感謝劍橋大學齣版社的KatrinaI-Ialliday和Clare Georgy，以及Keyword集團的Peter Lewis和Rasika Mathur，感謝他們的技術專長、耐心和鼓勵。

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