蛋白質組學中的蛋白質純化手冊 [Purifying Proteins for Proteomics] pdf epub mobi txt 電子書 下載 2026

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[澳] 辛普森（Simpson R.J） 編，茹炳根 譯

圖書標籤:

• 蛋白質組學
• 蛋白質純化
• 生物化學
• 分子生物學
• 實驗技術
• 蛋白質分析
• 質譜
• 樣品製備
• 生物技術
• 研究方法

齣版社： 化學工業齣版社

ISBN：9787122018335

版次：1

商品編碼：10068037

包裝：平裝

叢書名： 生物實驗室係列

外文名稱：Purifying Proteins for Proteomics

開本：16開

齣版時間：2009-03-01

用紙：膠版紙

頁數：734

字數：1077000

正文語種：中文

內容簡介

　　蛋白質組學這一領域剛開始趨於成熟，而開展蛋白質組學研究首先要把蛋白質從復雜的大分子混閤物中分離純化齣來。為此，需要經過驗證並值得信賴的蛋白質分離純化方案以用於蛋白質組學研究。
　　原著“Purifying Protein s for Proteomics：A Laboratory Manual”由國際專傢專傢Richa rd J．Simpson聯閤全球知名的專業實驗室共同撰寫，著名的美國冷泉港實驗室齣版社(Cold Spring Harbor Laboratory P ress)推齣，是《蛋白質與蛋白質組學實驗指南》的姐妹篇。
　　以蛋白質組學中的蛋白質純化為核心。《蛋白質組學中的蛋白質純化手冊》的主要內容有：
　　★蛋白質純化和蛋白質組學的各種實用技術。包括專門用於蛋白質組學研究的製備技術、色譜方法和電泳技術，用於結構蛋白質組學研究的蛋白質純化分析技術等
　　★上述各種技術方法的背景資料、理論、實驗方案、疑難解答以及相關的支持性信息和參考資料
　　《蛋白質組學中的蛋白質純化手冊》盡可能完全地羅列瞭各種實驗方案，可供不同規模實驗室的研究者選擇應用。在介紹每一個實驗方案時，以“step-by-step”操作指南的形式逐步展開，詳細列齣實驗儀器、試劑及操作步驟，並針對常見問題給齣經驗性的提示或解決方案。
　　毫無疑問，對於蛋白質化學、生物化學的研究人員在蛋白質組學這一新興領域尋求新的技術方法，《蛋白質組學中的蛋白質純化手冊》是一部必備的實驗指南。而對於遺傳學、細胞生物學、分子生物學研究人員開展錶型和細胞功能研究，以及醫學和生物工程領域開展蛋白質相關研究，《蛋白質組學中的蛋白質純化手冊》也是基本的實驗工具書。

內頁插圖

目錄

第1部分：供蛋白質組學分析的蛋白樣品製備
第1章 分離科學在蛋白質組學中的作用
1.1 製備純化蛋白：蛋白質微陣和結構蛋白質組學的瓶頸
1.2 以質譜為基礎的蛋白質鑒定
1.3 蛋白質組學所麵臨的一個關鍵技術的挑戰：減少樣品的復雜性
1.4 本書的概述
參考文獻
選讀文獻
網絡資源

第2章 蛋白質的純化策略
2.1 挑戰
2.2 蛋白質的量和純度要求
2.3 重組蛋白通常能簡化純化過程
2.4 可根據蛋白質的內在特性來分離蛋白質
2.5 設計蛋白質純化方案
2.6 應用：膜相關抗原A33的純化
參考文獻
選讀文獻

第Ⅱ部分：蛋白質組學中製備蛋白樣品的色譜方法
第3章 蛋白質和肽純化的色譜方法導論
3.1 基本概念
3.2 色譜·眭能
實驗方案
方案1輕拍一填裝法乾式填裝剛性固體柱
色譜術語錶
參考文獻
選讀文獻
網絡資源

第4章 全蛋白的多維色譜
4.1 MDLC用於蛋白質分級分離的目的
4.2 策略
4.3 主要文獻概述
4.4 MDLc的理論參數
4.5 色譜模式：正交性與相容性
4.6 與其他技術的性能比較
4.7 MDLC的常見問題
4.8 發展潛力
4.9 樣品處理方案：SEC／反相色譜法分離大腸杆菌蛋白
4.10 研究實例：MDLC分析酵母蛋白提取物
4.11 結論
參考文獻

第5章 可溶性重組蛋白的高通量篩選
5.1 引言
實驗方案
方案1 設計平行剋隆錶達載體
方案2 平行剋隆所用載體的製備
方案3 黏末端PcR産物的製備和消化載體的連接
方案4 把DNA轉化到細菌中
方案5 誘導和篩選可溶性融閤蛋白
參考文獻

第6章 離子交換色譜
6.1 IEC利用瞭分子間的靜電力
6.2 幾種IEC的模式
6.3 IEC中緩衝液的選擇很重要
6.4 離子交換介質和色譜分離裝置
實驗方案
方案1 離子交換柱的選擇
方案2 離子交換柱的製備
方案3 用IEC分離蛋白質
IEC柱的清洗
IEC的優化和常見問題
參考文獻
網絡資源
離子交換介質的供應商

第7章 尺寸排阻色譜
7.1 小分子更易進入凝膠介質間的空隙
7.2 分配係數Kd和有效分配係數K描述瞭溶質在特定凝膠中的洗脫情況
7.3 SEC分離相似形狀分子的能力取決於凝膠的選擇範圍
7.4 分子的形狀對其洗脫時間的影響
7.5 影響洗脫蛋白分辨率的因素
7.6 SEC在純化方案中的作用
7.7 SEC中緩衝液、溶液和試劑的配製
7.8 SEC中蛋白樣品和肽樣品的預處理
7.9 SEC液相色譜裝置
7.10 利用SEC分離純化的例子
實驗方案
方案1 尺寸排阻色譜柱的填裝
方案2 尺寸排阻色譜的製備
附加方案：分析性尺寸排阻色譜
方案3 用尺寸排阻色譜進行蛋白質的脫鹽和緩衝液的更換
柱的清洗和保養操作
關於SEC的常見問題
參考文獻

第8章 反相高效液相色譜在蛋白質分離和純化中的應用
8.1 ：RP-HPLC的特點與機製
8.2 分離機製
8.3 RP-HPLC基於“疏水腳”的細微差異分離多肽
8.4 RP-HPLC柱的特點與操作
8.5 流動相
8.6 溫度
8.7 錶麵活性劑對反相分離的影響
8.8 在質譜鑒定前用RP-HPLC分級分離多肽
8.9 RP.HPLC常見問題指南
實驗方案
方案1 RPHPLC分離蛋白質的標準色譜條件
方案2 RP-HPLC分離多肽的標準色譜條件
參考文獻
選讀文獻
網絡資源

第9章 疏水相互作用色譜
9.1 HIC與RP-HPLC的區彆
9.2 HIC的基本原理
9.3 實驗的影響因素
實驗方案
方案1 用HIC分離蛋白質
參考文獻

第10章 親和色譜與免疫親和色譜
10.1 親和色譜的實際應用
10.2 凝集素親和色譜
10.3 配基親和色譜
10.4 免疫親和色譜
10.5 DNA親和色譜
10.6 共價色譜
10.7 采用巰基一二硫鍵互換反應的共價色譜
實驗方案
方案1 凝集素一瓊脂糖凝膠親和色譜
方案2 蛋白質配基親和色譜
方案3 製備抗體親和樹脂過程中抗體的定位
方案4 DNA親和柱的製備
方案5 DNA親和色譜
方案6 從僅被混有不可逆失活的亞磺酸氧化産物中以可逆失活混閤的二硫化物形式純化木瓜蛋白酶
方案7 以瓊脂糖一榖胱甘肽一2一吡啶二硫化物凝膠作為填料的共價色譜
方案8 使用活化的Thiopropyl一Sepharose6B凝膠的共價色譜
參考文獻
網絡資源

第11章 蛋白質組學研究中的染料配基親和色譜
11.1 方法的設計和優化
11.2 染料配基吸附劑的再生和儲存
實驗方案
方案1 染料在多羥基介質中的固定化
附加方案：固定化配基濃度的測定
方案2 通過結閤目的蛋白的能力來篩選固定化染料
方案3 吸附條件的優化
方案4 洗脫條件的優化
方案5 分批式試管法計算吸附劑的有效容量
方案6 用染料配基親和色譜純化蛋白
11.3 研究實例：使用CibacronBlue3GA-Sepharose親和吸附劑純化重組甲酸脫氫酶
參考文獻

第12章 固定化金屬離子親和色譜
12.1 IMAC的基本原理
12.2 IMAC的基本操作
12.3 IMAC最常用於純化帶多聚組氨酸標簽的蛋白質
12.4 目的蛋白性質未知時可使用IMA
12.5 磷蛋白和磷酸肽的分離
實驗方案
方案1 IMAC預裝柱的準備
第13章 用羥磷灰石進行蛋白質色譜
第14章 色譜聚焦

第Ⅲ部分：蛋白質組學中製備蛋白樣品的電泳方法
第15章 電泳分離蛋白質策略導論
第16章 雙嚮凝膠電泳分離蛋白質
第17章 在MCE中通過等電位分段法進行高分辨率雙嚮凝膠電泳來製備樣品
第18章 一種電泳純化蛋白質的方法：GradiflowBF400儀
第19章 用自由流動電泳技術純化蛋白質

第Ⅳ部分：用於結構蛋白質組學的純化蛋白的分析
第20章 已純化蛋白質鑒定方法導論
第21章 用質譜測定蛋白質的特性
第22章 分析超速離心：蛋白質大小、構象和相互作用
第23章 蛋白質構象穩定性的測定
第24章 錶麵等離子體共振與質譜聯用：鑒定結閤配體及描述相互作用
第25章 糖蛋白中糖的分析

附錄1 蛋白質結構概述
附錄2 蛋白質濃度的測定
附錄3 蛋白質溶液的濃縮
附錄4 蛋白質的儲存穩定性
附錄5 單嚮聚丙烯酰胺凝膠電泳
附錄6 疑難問題解決指南
附錄7 注意事項
索引

精彩書摘

　　如果一個蛋白質的結構不能從其氨基酸序列來得以精確的預測，那麼，我們如何能在一定水平上搜索到有關其功能方麵的詳細知識呢？在不久的將來，至少能通過下麵的方式得到答案，即將目的蛋白純化到足夠程度並獲得足夠量，以允許對其生物化學和結構進行精細的分析。如果研究者有一個好的純化方案可以遵循，那是非常幸運的。事實上，更多的時候不是這樣的，而是要修改已有的純化方案，甚至要重新做一個方案。本章概述瞭在設計純化方案時需要考慮的因素以及在蛋白質純化中某些新的和令人振奮的發展。各種蛋白質分離形式的理論和應用細節將在後麵的章節中敘述。
　　如果考慮到生物基質（如細胞或組織提取物）中存在復雜的大分子混閤物時，那麼蛋白質純化麵臨的挑戰就不言而喻瞭。由雙嚮凝膠電泳獲得的人上皮細胞蛋白質譜（錶達譜）就證明瞭這種復雜性（圖2.1）。在特定的細胞中，除感興趣的蛋白質（目的蛋白）外，還存在幾韆種具有不同性質的其他蛋白質（保守估計為5000～8000種），連同一起的還有非蛋白質物質，如DNA、RNA、多糖和脂類。即使是蛋白質，它們在細胞中的量也不同。某種高豐度的細胞骨架蛋白（如肌動蛋白）在細胞提取物中可能占到蛋白質總量的10％。另一種極端的例子是某種稀少的轉錄因子可能以非常低的水平（

前言/序言

創新藥物發現與開發：從靶點識彆到臨床前研究 本書旨在為藥物研發領域的科研人員、生物技術專傢以及製藥行業的專業人士提供一份全麵、深入的指南，聚焦於創新藥物從早期發現到臨床前研究階段的關鍵技術、策略和挑戰。 本書並非一本關於蛋白質純化技術的專業手冊，而是著眼於整個藥物研發流程的宏觀視角，深入探討如何將基礎生物學研究的發現轉化為具有臨床潛力的候選藥物。我們將從最基礎的藥物靶點識彆與驗證開始，逐步深入到先導化閤物的發現、優化，直至最終的臨床前安全性及有效性評估。 第一部分：藥物靶點識彆與驗證的策略革新 本部分詳述瞭現代藥物研發領域中，如何利用前沿的生物學工具和信息學方法來鎖定具有治療潛力的分子靶點。 1. 疾病機製理解與靶點篩選 成功的藥物研發始於對疾病分子機製的深刻理解。我們將詳細分析癌癥、神經退行性疾病、自身免疫性疾病等復雜疾病領域中，最新的基因組學、轉錄組學和代謝組學研究如何揭示新的、尚未被充分開發的藥物靶點。 高通量篩選技術在新靶點發現中的應用： 重點介紹CRISPR/Cas9介導的全基因組篩選、酵母雙雜交（Y2H）文庫篩選以及基於細胞錶的蛋白質組學方法（如Activity-Based Protein Profiling, ABPP）如何快速、無偏倚地識彆與疾病錶型相關的關鍵蛋白。 可成藥性（Druggability）評估： 強調靶點結構生物學特徵（如口袋深度、柔性、錶麵可及性）對後續小分子或生物製劑設計的重要性。我們將探討結構信息如何指導靶點選擇，避免進入“死鬍同”。 2. 靶點驗證的嚴謹性：功能學與臨床相關性 識彆靶點僅僅是第一步，驗證其在疾病生理中的核心作用至關重要。本章將側重於構建可靠的體內外（In Vivo/In Vitro）驗證模型。 基因編輯技術在功能驗證中的應用： 深入討論使用條件性敲除（如Cre-LoxP係統）和定點突變模型來模擬人類疾病狀態，精確評估靶點失活或激活對疾病進程的影響。 類器官與人體係統模型（Organ-on-a-Chip）： 探討如何利用先進的3D細胞培養技術和微流控平颱，建立更接近人體生理環境的疾病模型，以提高靶點驗證的生理相關性。 第二部分：先導化閤物的發現與優化：從“苗頭”到“鉛” 一旦靶點被確證，下一步就是尋找能夠有效調節該靶點的分子實體。本部分聚焦於高效的化閤物發現流程，並詳細闡述如何通過結構優化提升藥物分子的各項性能。 3. 高效篩選與化閤物庫管理 本章詳細介紹瞭大規模篩選策略及其在發現初始活性化閤物（Hits）中的作用。 基於高內涵成像（HCI）的篩選： 探討如何利用自動化顯微成像技術，從形態學、細胞骨架變化等多個維度獲取比傳統單一指標更豐富的信息，以識彆具有新穎作用機製的化閤物。 化學多樣性與選擇性： 分析如何構建具有高化學空間覆蓋率的化閤物庫，以及在初篩階段如何快速排除脫靶活性（Off-target Activity）和非特異性抑製劑。 4. 結構優化：ADMET與藥效學（PD）的平衡 從活性“苗頭”（Hit）到具有臨床潛力的“先導化閤物”（Lead）是一個迭代和權衡的過程。本部分側重於優化化學結構以改善藥物的藥代動力學性質和降低毒性。 構效關係（SAR）的迭代深化： 介紹現代計算化學和定量構效關係（QSAR）模型如何指導化學傢進行精確的結構修飾，以提升效價（Potency）和選擇性。 早期ADMET預測與篩選： 強調在發現階段即引入對吸收（Absorption）、分布（Distribution）、代謝（Metabolism）、排泄（Excretion）和毒性（Toxicity）的預測性評估。具體討論膜滲透性模型、細胞色素P450酶抑製/誘導的體外預測方法，以及如何規避潛在的肝毒性和心髒毒性風險（如hERG通道阻斷）。 第三部分：生物製劑（Biologics）的開發前沿 隨著靶嚮療法和免疫療法的興起，生物大分子藥物（如抗體、多肽、重組蛋白）已成為藥物研發的重要組成部分。本部分專門探討生物製劑開發的獨特挑戰與機遇。 5. 單剋隆抗體的工程化設計 本章詳細解析瞭現代抗體工程學的關鍵技術，包括如何提高抗體的親和力、降低免疫原性並實現靶嚮遞送。 親和力成熟與人源化： 介紹噬菌體展示、酵母展示和核糖體展示等技術在優化抗體結閤常數（Kd）中的應用，以及如何通過結構修飾實現從非人源抗體到臨床級人源化抗體的轉化。 新型抗體結構： 探討雙特異性抗體（BsAbs）、抗體偶聯藥物（ADCs）以及抗體片段藥物（如Nanobodies）的設計原理、優勢與生産挑戰。 6. 免疫療法的機製設計與前體評估 免疫檢查點抑製劑和細胞療法（CAR-T/TCR-T）的成功引發瞭對新型免疫調節劑的巨大需求。 激活與抑製性免疫通路靶點： 分析新的共刺激分子和免疫抑製分子（如LAG-3, TIGIT）的結構特點及其作為藥物靶點的潛力。 細胞療法的工程化： 討論如何設計更穩定、更具體內持久性的T細胞受體（CAR），以及如何剋服T細胞耗竭和實體瘤微環境帶來的治療障礙。 第四部分：臨床前評估與轉化醫學的橋梁 本部分關注如何設計嚴謹的臨床前研究，為新藥進入人體臨床試驗提供充分的安全性和有效性數據支持。 7. 藥理學與毒理學評估的優化 臨床前階段是藥物研發中成本最高、風險最大的環節之一。本章強調使用更具預測性的模型來減少臨床失敗率。 PK/PD建模與劑量設計： 介紹如何利用藥代動力學（PK）與藥效學（PD）數據建立耦閤模型，以預測人體劑量範圍，並確定最佳給藥頻率。 早期毒理學信號的識彆： 重點介紹利用基因毒性、遺傳毒性、安全性藥理學（如心血管和中樞神經係統安全評估）的綜閤體係，以提前識彆潛在的脫靶毒性。 8. 轉化醫學中的生物標誌物策略 生物標誌物是連接基礎研究、臨床前測試和人體臨床試驗的“翻譯工具”。 機製生物標誌物與療效預測： 討論如何利用靶點占有率（Target Occupancy）的生物標誌物（如PET成像配體或可檢測的代謝物）來量化藥物活性，並預測患者對治療的反應。 臨床試驗設計中的生物標誌物整閤： 介紹如何利用伴隨診斷（Companion Diagnostics）指導患者分層，提高I期和II期臨床試驗的成功率。 本書通過對這些核心環節的係統性闡述，旨在指導研發人員剋服當前藥物發現和開發中遇到的復雜技術瓶頸，加速具有高臨床價值的創新療法進程。全書結構嚴謹，內容聚焦於方法學的前沿進展與其實際應用，是藥物研發人員不可或缺的參考工具書。

評分☆☆☆☆☆

如果考慮到生物基質（如細胞或組織提取物）中存在復雜的大分子混閤物時，那麼蛋白質純化麵臨的挑戰就不言而喻瞭。由雙嚮凝膠電泳獲得的人上皮細胞蛋白質譜（錶達譜）就證明瞭這種復雜性（圖2.1）。在特定的細胞中，除感興趣的蛋白質（目的蛋白）外，還存在幾韆種具有不同性質的其他蛋白質（保守估計為5000～8000種），連同一起的還有非蛋白質物質，如DNA、RNA、多糖和脂類。即使是蛋白質，它們在細胞中的量也不同。某種高豐度的細胞骨架蛋白（如肌動蛋白）在細胞提取物中可能占到蛋白質總量的10％。另一種極端的例子是某種稀少的轉錄因子可能以非常低的水平（

評分☆☆☆☆☆

一直沒拆，今天剛打開，不知道是本身書的問題還是運輸問題，到手後就變成這樣瞭，損壞嚴重，很生氣。

評分☆☆☆☆☆

不錯的專業書，令人滿意。

評分☆☆☆☆☆

隨著各種基因組序列計劃的成功完成，包括人類基因組在內的150多個已公開的基因組計劃，生物學傢現在關注更多的是各個基因組中編碼蛋白的結構和功能，試圖確定基因的真正功能。由於此領域的興趣不斷增長，冷泉港實驗室齣版社（ColdSpring Harbor Laboratory Press）於2003年齣版瞭《蛋白質與蛋白質組學實驗指南》（Proteins and Proteomics：A Laboratory Manual）一書，全麵介紹瞭各種蛋白質組學研究方法，包括蛋白質分離，特彆是單嚮凝膠和雙嚮凝膠（2D膠）的方法，以及經典的“pull-down”技術，即用親和標簽來分離蛋白質及其相互作用配體。此書還包括如何用傳統的氨基末端和羧基末端序列分析以及質譜方法，來鑒定通過這些手段分離齣來的蛋白質（包括翻譯後修飾，特彆是磷酸化位點）。

評分☆☆☆☆☆

都是正版書，不錯~~！！！！

評分☆☆☆☆☆

隨著各種基因組序列計劃的成功完成，包括人類基因組在內的150多個已公開的基因組計劃，生物學傢現在關注更多的是各個基因組中編碼蛋白的結構和功能，試圖確定基因的真正功能。由於此領域的興趣不斷增長，冷泉港實驗室齣版社（ColdSpring Harbor Laboratory Press）於2003年齣版瞭《蛋白質與蛋白質組學實驗指南》（Proteins and Proteomics：A Laboratory Manual）一書，全麵介紹瞭各種蛋白質組學研究方法，包括蛋白質分離，特彆是單嚮凝膠和雙嚮凝膠（2D膠）的方法，以及經典的“pull-down”技術，即用親和標簽來分離蛋白質及其相互作用配體。此書還包括如何用傳統的氨基末端和羧基末端序列分析以及質譜方法，來鑒定通過這些手段分離齣來的蛋白質（包括翻譯後修飾，特彆是磷酸化位點）。

評分☆☆☆☆☆

一直沒拆，今天剛打開，不知道是本身書的問題還是運輸問題，到手後就變成這樣瞭，損壞嚴重，很生氣。

評分☆☆☆☆☆

買來建課題組書庫的 不錯~

評分☆☆☆☆☆

內容很豐富的。蛋白純化的應用實例不足