蛋白質組學中的蛋白質純化手冊 [Purifying Proteins for Proteomics] epub pdf mobi txt 電子書 下載 2024

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內容簡介

　　蛋白質組學這一領域剛開始趨於成熟，而開展蛋白質組學研究首先要把蛋白質從復雜的大分子混閤物中分離純化齣來。為此，需要經過驗證並值得信賴的蛋白質分離純化方案以用於蛋白質組學研究。
　　原著“Purifying Protein s for Proteomics：A Laboratory Manual”由國際專傢專傢Richa rd J．Simpson聯閤全球知名的專業實驗室共同撰寫，著名的美國冷泉港實驗室齣版社(Cold Spring Harbor Laboratory P ress)推齣，是《蛋白質與蛋白質組學實驗指南》的姐妹篇。
　　以蛋白質組學中的蛋白質純化為核心。《蛋白質組學中的蛋白質純化手冊》的主要內容有：
　　★蛋白質純化和蛋白質組學的各種實用技術。包括專門用於蛋白質組學研究的製備技術、色譜方法和電泳技術，用於結構蛋白質組學研究的蛋白質純化分析技術等
　　★上述各種技術方法的背景資料、理論、實驗方案、疑難解答以及相關的支持性信息和參考資料
　　《蛋白質組學中的蛋白質純化手冊》盡可能完全地羅列瞭各種實驗方案，可供不同規模實驗室的研究者選擇應用。在介紹每一個實驗方案時，以“step-by-step”操作指南的形式逐步展開，詳細列齣實驗儀器、試劑及操作步驟，並針對常見問題給齣經驗性的提示或解決方案。
　　毫無疑問，對於蛋白質化學、生物化學的研究人員在蛋白質組學這一新興領域尋求新的技術方法，《蛋白質組學中的蛋白質純化手冊》是一部必備的實驗指南。而對於遺傳學、細胞生物學、分子生物學研究人員開展錶型和細胞功能研究，以及醫學和生物工程領域開展蛋白質相關研究，《蛋白質組學中的蛋白質純化手冊》也是基本的實驗工具書。

內頁插圖

目錄

第1部分：供蛋白質組學分析的蛋白樣品製備
第1章 分離科學在蛋白質組學中的作用
1.1 製備純化蛋白：蛋白質微陣和結構蛋白質組學的瓶頸
1.2 以質譜為基礎的蛋白質鑒定
1.3 蛋白質組學所麵臨的一個關鍵技術的挑戰：減少樣品的復雜性
1.4 本書的概述
參考文獻
選讀文獻
網絡資源

第2章 蛋白質的純化策略
2.1 挑戰
2.2 蛋白質的量和純度要求
2.3 重組蛋白通常能簡化純化過程
2.4 可根據蛋白質的內在特性來分離蛋白質
2.5 設計蛋白質純化方案
2.6 應用：膜相關抗原A33的純化
參考文獻
選讀文獻

第Ⅱ部分：蛋白質組學中製備蛋白樣品的色譜方法
第3章 蛋白質和肽純化的色譜方法導論
3.1 基本概念
3.2 色譜·眭能
實驗方案
方案1輕拍一填裝法乾式填裝剛性固體柱
色譜術語錶
參考文獻
選讀文獻
網絡資源

第4章 全蛋白的多維色譜
4.1 MDLC用於蛋白質分級分離的目的
4.2 策略
4.3 主要文獻概述
4.4 MDLc的理論參數
4.5 色譜模式：正交性與相容性
4.6 與其他技術的性能比較
4.7 MDLC的常見問題
4.8 發展潛力
4.9 樣品處理方案：SEC／反相色譜法分離大腸杆菌蛋白
4.10 研究實例：MDLC分析酵母蛋白提取物
4.11 結論
參考文獻

第5章 可溶性重組蛋白的高通量篩選
5.1 引言
實驗方案
方案1 設計平行剋隆錶達載體
方案2 平行剋隆所用載體的製備
方案3 黏末端PcR産物的製備和消化載體的連接
方案4 把DNA轉化到細菌中
方案5 誘導和篩選可溶性融閤蛋白
參考文獻

第6章 離子交換色譜
6.1 IEC利用瞭分子間的靜電力
6.2 幾種IEC的模式
6.3 IEC中緩衝液的選擇很重要
6.4 離子交換介質和色譜分離裝置
實驗方案
方案1 離子交換柱的選擇
方案2 離子交換柱的製備
方案3 用IEC分離蛋白質
IEC柱的清洗
IEC的優化和常見問題
參考文獻
網絡資源
離子交換介質的供應商

第7章 尺寸排阻色譜
7.1 小分子更易進入凝膠介質間的空隙
7.2 分配係數Kd和有效分配係數K描述瞭溶質在特定凝膠中的洗脫情況
7.3 SEC分離相似形狀分子的能力取決於凝膠的選擇範圍
7.4 分子的形狀對其洗脫時間的影響
7.5 影響洗脫蛋白分辨率的因素
7.6 SEC在純化方案中的作用
7.7 SEC中緩衝液、溶液和試劑的配製
7.8 SEC中蛋白樣品和肽樣品的預處理
7.9 SEC液相色譜裝置
7.10 利用SEC分離純化的例子
實驗方案
方案1 尺寸排阻色譜柱的填裝
方案2 尺寸排阻色譜的製備
附加方案：分析性尺寸排阻色譜
方案3 用尺寸排阻色譜進行蛋白質的脫鹽和緩衝液的更換
柱的清洗和保養操作
關於SEC的常見問題
參考文獻

第8章 反相高效液相色譜在蛋白質分離和純化中的應用
8.1 ：RP-HPLC的特點與機製
8.2 分離機製
8.3 RP-HPLC基於“疏水腳”的細微差異分離多肽
8.4 RP-HPLC柱的特點與操作
8.5 流動相
8.6 溫度
8.7 錶麵活性劑對反相分離的影響
8.8 在質譜鑒定前用RP-HPLC分級分離多肽
8.9 RP.HPLC常見問題指南
實驗方案
方案1 RPHPLC分離蛋白質的標準色譜條件
方案2 RP-HPLC分離多肽的標準色譜條件
參考文獻
選讀文獻
網絡資源

第9章 疏水相互作用色譜
9.1 HIC與RP-HPLC的區彆
9.2 HIC的基本原理
9.3 實驗的影響因素
實驗方案
方案1 用HIC分離蛋白質
參考文獻

第10章 親和色譜與免疫親和色譜
10.1 親和色譜的實際應用
10.2 凝集素親和色譜
10.3 配基親和色譜
10.4 免疫親和色譜
10.5 DNA親和色譜
10.6 共價色譜
10.7 采用巰基一二硫鍵互換反應的共價色譜
實驗方案
方案1 凝集素一瓊脂糖凝膠親和色譜
方案2 蛋白質配基親和色譜
方案3 製備抗體親和樹脂過程中抗體的定位
方案4 DNA親和柱的製備
方案5 DNA親和色譜
方案6 從僅被混有不可逆失活的亞磺酸氧化産物中以可逆失活混閤的二硫化物形式純化木瓜蛋白酶
方案7 以瓊脂糖一榖胱甘肽一2一吡啶二硫化物凝膠作為填料的共價色譜
方案8 使用活化的Thiopropyl一Sepharose6B凝膠的共價色譜
參考文獻
網絡資源

第11章 蛋白質組學研究中的染料配基親和色譜
11.1 方法的設計和優化
11.2 染料配基吸附劑的再生和儲存
實驗方案
方案1 染料在多羥基介質中的固定化
附加方案：固定化配基濃度的測定
方案2 通過結閤目的蛋白的能力來篩選固定化染料
方案3 吸附條件的優化
方案4 洗脫條件的優化
方案5 分批式試管法計算吸附劑的有效容量
方案6 用染料配基親和色譜純化蛋白
11.3 研究實例：使用CibacronBlue3GA-Sepharose親和吸附劑純化重組甲酸脫氫酶
參考文獻

第12章 固定化金屬離子親和色譜
12.1 IMAC的基本原理
12.2 IMAC的基本操作
12.3 IMAC最常用於純化帶多聚組氨酸標簽的蛋白質
12.4 目的蛋白性質未知時可使用IMA
12.5 磷蛋白和磷酸肽的分離
實驗方案
方案1 IMAC預裝柱的準備
第13章 用羥磷灰石進行蛋白質色譜
第14章 色譜聚焦

第Ⅲ部分：蛋白質組學中製備蛋白樣品的電泳方法
第15章 電泳分離蛋白質策略導論
第16章 雙嚮凝膠電泳分離蛋白質
第17章 在MCE中通過等電位分段法進行高分辨率雙嚮凝膠電泳來製備樣品
第18章 一種電泳純化蛋白質的方法：GradiflowBF400儀
第19章 用自由流動電泳技術純化蛋白質

第Ⅳ部分：用於結構蛋白質組學的純化蛋白的分析
第20章 已純化蛋白質鑒定方法導論
第21章 用質譜測定蛋白質的特性
第22章 分析超速離心：蛋白質大小、構象和相互作用
第23章 蛋白質構象穩定性的測定
第24章 錶麵等離子體共振與質譜聯用：鑒定結閤配體及描述相互作用
第25章 糖蛋白中糖的分析

附錄1 蛋白質結構概述
附錄2 蛋白質濃度的測定
附錄3 蛋白質溶液的濃縮
附錄4 蛋白質的儲存穩定性
附錄5 單嚮聚丙烯酰胺凝膠電泳
附錄6 疑難問題解決指南
附錄7 注意事項
索引

精彩書摘

　　如果一個蛋白質的結構不能從其氨基酸序列來得以精確的預測，那麼，我們如何能在一定水平上搜索到有關其功能方麵的詳細知識呢？在不久的將來，至少能通過下麵的方式得到答案，即將目的蛋白純化到足夠程度並獲得足夠量，以允許對其生物化學和結構進行精細的分析。如果研究者有一個好的純化方案可以遵循，那是非常幸運的。事實上，更多的時候不是這樣的，而是要修改已有的純化方案，甚至要重新做一個方案。本章概述瞭在設計純化方案時需要考慮的因素以及在蛋白質純化中某些新的和令人振奮的發展。各種蛋白質分離形式的理論和應用細節將在後麵的章節中敘述。
　　如果考慮到生物基質（如細胞或組織提取物）中存在復雜的大分子混閤物時，那麼蛋白質純化麵臨的挑戰就不言而喻瞭。由雙嚮凝膠電泳獲得的人上皮細胞蛋白質譜（錶達譜）就證明瞭這種復雜性（圖2.1）。在特定的細胞中，除感興趣的蛋白質（目的蛋白）外，還存在幾韆種具有不同性質的其他蛋白質（保守估計為5000～8000種），連同一起的還有非蛋白質物質，如DNA、RNA、多糖和脂類。即使是蛋白質，它們在細胞中的量也不同。某種高豐度的細胞骨架蛋白（如肌動蛋白）在細胞提取物中可能占到蛋白質總量的10％。另一種極端的例子是某種稀少的轉錄因子可能以非常低的水平（

前言/序言

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內容詳盡，通俗易懂，有一定的參考價值

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努力學習中，加油~~~~~~

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很實用的書，能多打點摺就好瞭

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買來建課題組書庫的 不錯~

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　　《蛋白質組學中的蛋白質純化手冊》作為《蛋白質與蛋白質組學實驗指南》的姊妹篇，其目的是為研究者提供重要的純化策略（第1部分）、預分級分離的方法一一色譜（第Ⅱ部分）和電泳（第Ⅲ部分），以避開動態範圍的限製。除瞭這些預分級分離方法外，本書還涵蓋瞭許多經典的蛋白質分離方法。這些方法可用來進行高分辨率三維結構分析，即以結構基因組學（也被稱為結構蛋白質組學）和蛋白質微陣（蛋白質芯片）分析為目的的高通量製備純化蛋白質。此外，第1V部分介紹瞭測定純化蛋白-功能完整性的方法（如構象穩定性、精確分子質量，聚閤狀態的測定以及用錶麵等離子體共振測定結閤特性），還描述瞭糖蛋白中糖的分析；提供的實驗方案詳述瞭如何從糖蛋白中除去聚糖和製備單糖用

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很專業的生物學圖書，頂一下!

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