生物药物研究与应用丛书：抗体药物研究与应用 [Antibody-based Drug] epub pdf mobi txt 电子书 下载 2024

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内容简介

　　抗体对相应的抗原具有高度的特异性，针对特定的、与疾病发生发展相关的靶分子（抗原），可以制备特异性的抗体。抗体用于治疗各种疾病特别在治疗癌症、自身免疫疾患和病毒感染中显示巨大的潜力和应用前景。据报道，目前全球年销售额居前10位的药物中，抗体药物占6种。显然，抗体药物（antibody-based drug）已成为生物医药发展的一个重要领域。

内页插图

目录

第一篇 抗体药物基本技术
第一章 抗体药物研究概况与前沿
第一节 治疗性抗体的发展史
第二节 治疗性抗体的研究进展
一、鼠源性单克隆抗体
二、重组单克隆抗体
三、免疫偶联物
四、高效小型化抗体
五、免疫融合蛋白
六、胞内抗体
七、抗体的评价策略
第三节 治疗性抗体的应用
一、恶性肿瘤的治疗性抗体
二、免疫系统疾病的治疗性抗体
三、病毒感染性疾病的治疗性抗体
四、心血管疾病的治疗性抗体
第四节 抗体药物产品研发
一、FDA批准的抗体药物
二、CFDA批准的抗体药物
三、抗体药物的全球市场
第五节 抗体药物发展趋势
第二章 杂交瘤与单克隆抗体
第一节 杂交瘤
一、B细胞杂交瘤
二、四细胞杂交瘤
三、嵌合McAb
四、T细胞杂交瘤
五、自然杀伤T细胞杂交瘤
六、巨噬细胞杂交瘤
第二节 单克隆抗体
一、抗体的基本概念
二、单抗的体外应用
第三节 药用单抗
一、药用单抗来源的亚词干
二、药用单抗的靶标亚词干
三、药用单抗的种类
第三章 基因工程抗体
第一节 抗体可变区基因的获得
一、从抗体生产细胞中克隆抗体可变区基因
二、构建抗体库以获得抗体可变区基因
第二节 基因工程抗体的种类与制备
一、选择合适的恒定区片段构建基因工程抗体
二、嵌合抗体
三、人源化抗体
四、全人源抗体
五、小分子抗体
六、双特异性抗体
七、新效能抗体
第三节 基因工程抗体的进一步改造
一、抗体可变区的进一步改造
二、抗体恒定区的进一步改造
第四章 抗体库技术
第一节 抗体库的基本类型
一、天然抗体库
二、抗原倾向性抗体库
三、半合成抗体库
四、全合成抗体库
第二节 用于抗体库构建的展示技术
第三节 核糖体展示单链抗体库技术
一、核糖体展示技术中的构建元件
二、体外翻译
三、亲和筛选
四、洗脱
五、扩增
……

第二篇 抗体药物应用技术
第三篇 抗体药物临床前研究
第四篇 抗体药物临床应用

精彩书摘

　　（一）传统筛选方法
　　克隆技术的选择在很大程度上依赖于特定细胞株的不同表现。克隆贴壁细胞相对容易，可在培养皿、微孔板或培养瓶中培养，因为其低密度的时候就很容易确认各个克隆。筛选途径包括斑点技术，克隆环和有限稀释法等。对悬浮细胞而言，通常需要固定化载体，比如把细胞接种到凝胶上（琼脂或者琼脂糖），或者像甲基纤维素之类的高黏性溶液中。
　　到目前为止，最常用的方法是有限稀释克隆（limited dilution clone，LDC），虽然这种方法劳动密集，通量较低，但由于其相对简单，成本也较低，还是得到了广泛应用。LDC方法就是将低密度细胞悬液分配到微孔板上，保证平均每个孔少于1个细胞。在显微镜下观察微孔板，标记每个含有单个细胞的孔板以便后续分析。如果细胞保持活性并扩增，那将会在微孔板里产生一个独立的细胞克隆，细胞悬液可通过酶联免疫吸附法（ELISA）等方法检测表达；表达浓度高的微孔可挑选出来进行下一步增殖。为了确保获得纯的单克隆，通常需要进行两次以上的克隆筛选。
　　尽管与其他传统筛选方法相比，LDC筛选高表达细胞能获得较高表达量，但这种方法还需要后续的产品分析，经常要花费8个月以上，并且产生高额费用。实际上每个品种只有几百个克隆能被定性检测，因为检测克隆数目较少，错过高表达细胞克隆的风险也在增加。与所有传统方法一样，LDC方法是假定单个细胞的分配，没有考虑到多细胞的聚集而带来的生长优势。这就无法完全确认细胞株的产生起源于同一个细胞，而只能说细胞株有克隆的可能性。对LDC方法的统计分析显示，经过反复多次处理后仍然不能保证其单克隆化[28，29]。所有的传统克隆方法都需要下游分析确认表达水平，由于不能在单个细胞的基础上检测蛋白分泌物，必须对亚克隆进行扩增。下游检测水平的敏感度不高，意味着这些方法受限于可有效分析的细胞数目。一定数量的细胞蛋白表达遵循这样的规律，大部分细胞表达没有明显差异，只有少数细胞会有高于平均水平的表达。这就可以预测，要发现一个良好特性的细胞株，需要评估成千上万的细胞克隆，对所有的传统筛选方法而言这都是不可能的。
　　（二）流式细胞术和细胞分选
　　使用流式细胞术对细胞进行筛选的优势在于筛选细胞数目大幅增加。每秒可以分析数万个细胞，亚群和单细胞也能从混合细胞群中分离出来，即使他们出现的频率低至10-6。经过多年发展，流式细胞分析已成为哺乳动物细胞培养过程重要的研究工具；对生物制药产品的在线监测系统也已应用到细胞培养当中。这推进了基于细胞表面表达蛋白分子，利用抗体或配体交联荧光素来分选细胞的方法的应用。
　　1.细胞表面蛋白表达在某些杂交瘤细胞株中，细胞表面重组蛋白或抗体与蛋白分泌水平相关。Marder等根据细胞表面抗体染色程度进行分组，比较细胞抗体表达量，提示细胞表面抗体表达水平和杂交瘤细胞分泌性抗体表达量正相关[30]。Brezinsky等在没有筛选剂甲氨蝶呤（MTX）情况下分选表面荧光强度最高的CHO细胞，获得的细胞株的特异性重组蛋白表达水平增加了20-25倍[31]。加入MTX诱导，增加到120倍。不过这样优秀的表现只限制于几个特定细胞株，并不是所有杂交瘤细胞都表现出这种相互关系，甚至源于同一细胞株中的不同个体在细胞表面染色上也有不同结果。
　　……

前言/序言

　　抗体对相应的抗原具有高度的特异性，针对特定的、与疾病发生发展相关的靶分子（抗原），可以制备特异性的抗体。抗体用于治疗各种疾病特别在治疗癌症、自身免疫疾患和病毒感染中显示巨大的潜力和应用前景。据报道，目前全球年销售额居前10位的药物中，抗体药物占6种。显然，抗体药物（antibody-based drug）已成为生物医药发展的一个重要领域。
　　抗体药物的研究与应用经历了漫长曲折的过程。抗体作为治疗剂的潜能，在20世纪初期即已引起医药研究者的关注。早期研究者曾报道，将癌细胞注入动物体内，取其抗血清进行治疗，但未能取得确定的疗效，甚至可能产生严重的毒副反应。在相当长时期内，抗血清一般用于中和外源性毒素如蛇毒等有效，但未能用于癌症和其他疾病的治疗。近30年来，以细胞工程和基因工程为基础的抗体工程技术的快速发展推动了抗体药物的研发和应用。主要体现在三个方面：①单克隆抗体。1975年Koehler和Milstein报道用B淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体，具有重大意义并取得突破性进展。单克隆抗体的特异性高，性质均一。可大大降低其在体内与正常组织细胞的交叉反应，为利用抗体治疗疾病，特别是治疗癌症带来了新的希望。目前研制中或已在临床应用的抗体药物，基本上都属于单克隆性的抗体制品；所以又称单克隆抗体治疗剂。为便于区别，此前以抗原免疫动物获得抗血清而制备的抗体则称为多克隆抗体。②基因工程抗体。利用DNA重组技术可以修饰抗体或制备各种模式的新型抗体。考虑到鼠源性抗体在人体可引起人抗鼠抗体（HAMA）反应，以基因工程技术改造鼠源性抗体，从而制备嵌合抗体或人源化抗体，并可进而制备全人源抗体。抗体人源化为抗体药物的临床应用奠定重要基础；而各种模式基因工程抗体的制备则可推动具有不同特点的新型抗体药物的发展。③抗体药物偶联物（antibody-drug conjugate，ADC），包括抗体及其片段与药物的化学偶联物以及基因工程融合蛋白；用放射性核素标联的抗体亦可归属此类。在肿瘤治疗方面，抗体药物偶联物的研制受到特别关注，因为它兼有抗体的特异性和“弹头”药物的效应功能；既显示靶向性又具有对肿瘤靶细胞的强烈杀伤作用。在癌症治疗中，抗体药物偶联物有可能取得更显著的疗效。
　　抗体药物具有多方面特点：①特异性。抗体对特定的抗原具有高度特异性，这是抗体药物突出的基本特征，是抗体药物用于靶向治疗的基础。②多样性。包括靶抗原多样性，抗体结构多样性，作用机制多样性等方面。对于抗体药物偶联物，还具有“弹头”分子多样性，可以利用各式各样的“弹头”分子制备偶联物。

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