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内容简介

　　《生物实验室系列：实时荧光定量PCR》具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点，受到生物学家们的青睐，促进了生命科学的发展。该技术是目前确定样品中DNA或RNA拷贝数最敏感、最准确的方法，还可进行多重反应，无污染，自动化程度高，在生物学的所有学科、医学基础和药学等领域得到广泛应用。
　　《生物实验室系列：实时荧光定量PCR》在介绍实时荧光定量PCR技术原理基础上，集中论述该技术在各个领域中的应用，包括检测致病菌、检测病毒、检测基因突变和临床、遗传病研究、肿瘤研究、环境微生物检测、动物学研究、基因表达检测和流行病学等。在编写时力求方法尽可能详细，对每一种方法提供了反应体系、反应条件和结果分析，还附有参考文献，但读者在具体应用时，也不宜照本宣科，在实验过程中应因事制宜，对实验条件进行必要的优化。
　　《生物实验室系列：实时荧光定量PCR》可供分子生物学、细胞生物学等生物学科，医学基础、药学等学科高年级本科生、研究生以及其他研究人员阅读参考。

目录

第一章 实时荧光定量PCR概述
第一节 实时荧光定量PCR的基本原理
一、引言
二、原理
第二节 实时荧光定量PCR仪
一、Applied Biosystems公司的系列实时荧光定量PCR仪
二、iQTM 5实时荧光定量PCR仪
三、LightCycler实时荧光定量PCR仪
四、SmartCycler System实时荧光定量PCR仪
五、Mx3000P实时荧光定量PCR仪
六、Rotor�睪ene实时荧光定量PCR仪
第三节 实时荧光定量PCR中的荧光化学物质
一、荧光染料
二、水解探针
三、分子信标
四、荧光标记引物
五、双探针杂交
六、复合探针
第四节 实时荧光定量PCR的定量方法
一、绝对定量
二、相对定量
第五节 实时荧光定量PCR的实验方法
一、以DNA为起始实验材料进行实时荧光定量PCR反应
二、以RNA为起始实验材料进行实时荧光定量RT�睵CR
第六节 实时荧光定量PCR实验中应注意的问题
一、扩增子的设计
二、实验方案的优化
三、实践中应该注意的问题
小结
本章参考文献

第二章 实时荧光定量PCR在病原菌检测中的应用
第一节 沙门菌的检测
一、引言
二、材料
三、方法
四、注意事项
五、应用
六、小结
本节参考文献
第二节 在幽门螺杆菌检测中的应用
一、引言
二、基本原理
三、试验材料
四、方法
五、注意事项
六、应用
七、小结
本节参考文献
第三节 在致病性大肠杆菌检测中的应用
一、检测DNA样品中fliCH7基因的Ｒeal�瞭ime PCR方法
二、检测RNA样品中rfbE和eae基因的Real�瞭ime PCR方法
本节参考文献
第四节 在肉毒梭菌检测中的应用
方案一SYBR Green Ⅰ Real�瞭ime PCR方法检测A型肉毒梭菌
一、引言
二、原理
三、实验目的
四、实验材料和方法
五、实验结果
六、讨论
方案二用TaqMan Real�瞭ime PCR对A型、B型和E型肉毒梭菌的检测
一、引言
二、原理
三、实验目的
四、实验材料和方法
五、实验结果
六、讨论
方案三TaqMan Real�瞭ime PCR 在肉毒梭菌C型毒素基因检测中的应用
一、引言
二、原理
三、实验目的
四、实验材料和方法
五、实验结果
六、讨论
本节参考文献
第五节 在嗜水气单胞菌检测中的应用
一、引言
二、材料
三、方法
四、应用
本节参考文献
小结

第三章 实时荧光定量PCR在病毒检测中的应用
第一节 实时荧光定量RT�睵CR在甲型H1N1检测中的应用
一、引言
二、试验目的
三、材料与试剂
四、试验方法
五、结果判定
六、注意事项
七、小结
本节参考文献
第二节 登革病毒的实时荧光定量RT�睵CR检测
一、引言
二、试验目的
三、材料与试剂
四、操作步骤
五、注意事项
本节参考文献
第三节 H5N1亚型高致病性禽流感病毒的实时荧光定量RT�睵CR检测
一、引言
二、试验目的
三、材料与试剂
四、操作步骤
五、试验结果判定
六、注意事项
本节参考文献
第四节 肠道病毒71型的实时荧光定量RT�睵CR检测
一、引言
二、试验目的
三、材料与试剂
四、操作步骤
五、结果分析
六、注意事项
本节参考文献
第五节 多重实时荧光定量PCR在呼吸道病毒检测中的应用
一、引言
二、试验目的
三、材料与试剂
四、试验原理与方法
五、结果判定
六、注意事项
七、小结
本节参考文献
第六节 实时荧光定量PCR用于重组杆状病毒滴度检测的研究
一、引言
二、试验目的
三、材料
四、方法
五、结果及分析
六、注意事项
七、小结
本节参考文献
第七节 实时荧光定量PCR在HIV检测中的应用
一、引言
二、基本原理
三、试验材料
四、方法
五、试验结果判定
六、注意事项
七、应用
本节参考文献
第八节 在检测HBV和HCV方面的应用
A�� 实时荧光定量PCR在检测HBV方面的应用
一、引言
二、材料和方法
三、小结
B�笔凳庇�光定量PCR在检测HCV方面的应用
一、引言
二、材料和方法
三、小结
本节参考文献

第四章 实时荧光定量PCR检测基因突变及临床应用
第一节 实时荧光定量PCR检测基因突变在遗传病诊断中的应用
一、引言
二、应用巢式PCR和TaqMan MGB探针Real�瞭ime PCR技术检测经典型苯丙酮
尿症（PKU）
三、应用SYBR Green Ⅰ Real�瞭ime PCR技术检测慢性骨髓增殖性疾病
第二节 实时荧光定量PCR检测基因突变在肿瘤诊断、治疗和预后中的应用
一、引言
二、应用ASB�睵CR方法检测Kras基因突变
第三节 实时荧光定量PCR检测基因突变在耐药病原体监测中的应用
一、引言
二、通过杂交探针实时荧光定量PCR检测临床分离的结核分枝杆菌的异烟肼抗性
三、FRET实时荧光定量PCR快速准确检测幽门螺杆菌耐克拉霉素相关的基因点
突变
本章参考文献

第五章 实时荧光定量PCR在遗传病研究中的应用
第一节 实时荧光定量PCR识别SNP的方法
一、原理
二、常用的突变识别方法
本节参考文献
第二节 实时荧光定量PCR在SNP分型中的应用
一、引言
二、试验目的
三、试验原理
四、试验材料
五、试验方法
六、结果与讨论
本节参考文献
第三节 等位基因特异性实时荧光定量PCR在DNA库中等位基因定量检测中的
应用
一、引言
二、试验目的
三、试验原理
四、试验材料
五、实验方法
六、结果与讨论
本节参考文献
第四节 等位基因特异性PCR结合分子信标实时荧光定量PCR在肿瘤和线粒体疾
病检测中的应用
一、引言
二、试验目的
三、试验原理
四、试验材料
五、试验方法
六、结果与讨论
本节参考文献

第六章 实时荧光定量PCR在肿瘤中的应用
第一节 实时荧光定量PCR在肿瘤早期诊断中的意义
方案1Pescadillo在乳腺癌组织中的表达及其临床意义
一、试验目的
二、基本原理
三、实验材料
四、实验方法
五、实验结果
六、小结
方案2实时荧光定量PCR检测microRNA在不同肿瘤细胞中的表达
一、实验目的
二、基本原理
三、材料
四、方法
五、结果
六、小结
第二节 实时荧光定量PCR在肿瘤预后评估中的应用
方案1实时荧光定量PCR检测uPA、PAI��1、TIMP��1 mRNA表达与乳腺癌预
后的关系
一、实验目的
二、实验材料
三、实验方法
四、实验结果
五、小结
方案2实时荧光定量PCR检测uPA mRNA表达在HER2阳性乳腺癌预后中的
意义
一、实验目的
二、实验材料
三、实验方法
四、实验结果
五、小结
第三节 实时荧光定量PCR在药物疗效判断中的作用
一、实验目的
二、材料
三、方法
四、结果
五、小结
第四节 实时荧光定量PCR在基因表达调控中的应用
一、实验目的
二、实验材料
三、实验方法
四、实验结果
五、小结
本章参考文献

第七章 实时荧光定量PCR在环境微生物检测中的应用
第一节 实时荧光定量PCR在检测土壤微生物中的应用
一、引言
二、试验目的
三、原理
四、土壤微生物DNA提取方法汇总
五、操作步骤
六、实时荧光定量PCR在土壤中病原菌定量检测中的应用
七、实时荧光定量PCR在土壤中生防菌的动态变化监测中的应用
本节参考文献
第二节 实时荧光定量PCR 技术在空气微生物检测中的应用
一、引言
二、试验目的
三、试验材料与方法
四、小结
本节参考文献
第三节 实时荧光定量PCR在检测水源微生物方面的应用
一、引言
二、基本原理
三、研究进展
四、实验方法
五、实验结果
六、结果分析
本节参考文献

第八章 实时荧光定量PCR在动物学研究中的应用
第一节 实时荧光定量PCR在动物感染性疾病监测和检测中的应用
一、引言
二、原理
三、材料
四、方法与步骤
五、注意事项
六、应用
本节参考文献
第二节 实时荧光定量PCR在转基因动物检测中的应用
一、引言
二、原理
三、材料
四、方法与步骤
五、注意事项
六、应用
本节参考文献
第三节 实时荧光定量PCR在突变动物检测和突变品系培育中的应用
一、引言
二、SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR在HLA��1502基因检测中的应用
三、实时荧光定量PCR在白化突变鼠检测中的应用
四、注意事项
五、应用
本节参考文献
第四节 实时荧光定量PCR在药物效果评价动物实验中的应用
一、引言
二、实时荧光定量PCR在马传染性贫血病毒疫苗效果评价中的应用
三、利用实时荧光定量PCR评价以离子交换色谱纯化抗体时外源病毒因子的清除效果
四、注意事项
五、应用
本节参考文献

第九章 实时荧光定量PCR在基因表达检测和流行病学中的应用
第一节 实时荧光定量PCR在分析基因差异表达中的应用
一、实时荧光定量PCR实验的设计和优化
二、实时荧光定量PCR应用实例
三、实验注意事项
四、小结
本节参考文献
第二节 实时荧光定量PCR检测CAR基因在小鼠肺发育不同阶段中的表达
一、引言
二、材料及方法
三、数据分析
本节参考文献
第三节 实时荧光定量PCR在流行病学中的应用
一、微生物的检测和鉴定
二、耐药分析
三、DNA甲基化、单核苷酸多态性及突变分析
四、肿瘤基因检测
五、基因表达差异分析
六、微生态中微生物种的相对定量
本节参考文献

前言/序言

　　21世纪是生命科学的世纪，这已成为人们的共识。
　　生命科学随着人类对自身和自然的认识、探索而萌芽，随着人类生产和科学实践的进步而发展。现代生命科学包括生物学、医学、农学等传统学科领域，以及生物学、生物技术与环境科学乃至社会科学等其他学科相互渗透、交叉而产生的新型学科体系。20世纪后叶，现代生物科学尤其是分子生物学取得了一系列突破性成就，使得生命科学在自然科学体系中的位置发生了革命性的变化，成为21世纪的带头学科。人们对生命科学也寄予了无限的期望，希望能够解决人类社会所面临的人口膨胀、资源匮乏、疾病危害、环境污染和生态破坏等一系列重大问题。
　　回顾生命科学的发展历程，实验技术一直起着非常重要的促进作用。如17世纪Leeuwenhoek等人发明并应用显微镜技术，直接催生了“细胞学说”的建立和发展；1973年Cohn和Boyer完成了DNA体外重组实验，标志着基因工程的肇始；1988年KaryMullis发明的PCR技术甚至使生命科学产生了飞跃性的发展。可以说，生命科学每时每刻离不开实验，实验是开启神奇的生命王国大门的钥匙。没有实验技术的不断进步，也就没有生命科学今天的巨大发展；同时，生命科学的发展又对实验技术提出了更高的要求，进一步刺激了后者的不断进步。生命科学正是在“实验催生和验证着基础理论，理论指导和发展了实验技术”的不断循环中从必然王国走向自由王国。
　　工欲善其事，必先利其器。为了有助于生命科学工作者更多地了解相关实验技术和仪器设备，更好地设计实验方案，更有效地开展实验过程，更合理地处理实验结果，化学工业出版社组织出版了《生物实验室系列》图书。系列图书在整体规划的基础上，本着“经典、前沿、实用，理论与技术并重”的原则组织编写，分批出版。
　　在题材上，系列图书涵盖综合实验技术和单项实验技术两个方面。其中综合实验技术既有以实验目的为题，如“蛋白质化学分析技术”，内容纵向覆盖多项实验技术；也有以某一生命学科领域的综合实验技术为题，如“发酵工程实验技术”、“生物化学实验技术”等。而单项实验技术则以深入介绍某一专项技术及其应用为主，在阐述其基本原理的基础上，横向介绍该项技术在多个领域的应用，如“双向电泳技术”、“流式细胞术”等。
　　在内容上，系列图书主要有以下两个显著特点。一是强调先进性——除了系统介绍常用和经典实验技术以外，特别突出了当前该领域实验手段的新理论、新技术、新发展，为国内专业人员起到借鉴和引导作用。二是强调可操作性——对于每一项实验技术，系统介绍其原理方法、设备仪器和实验过程，让读者明了实验的目的、方案设计以及具体步骤和结果处理，以期起到实验指南的作用。
　　本系列图书坚持质量为先，开拓国内和国际两个出版资源。一方面，邀请国内相关领域兼具理论造诣和丰富实验室工作经验的专家学者编著；另一方面，时刻关注国际生命科学前沿领域和先进技术的进展，及时引进（翻译或影印）国外知名出版社的权威力作。
　　《生物实验室系列》图书的读者对象设定为国内从事生命科学及生物技术和相关领域（如医学、药学、农学）的专业研究人员，企业或公司的生产、研发、管理技术人员，以及高校相关专业的教师、研究生等。
　　我们殷切希望《生物实验室系列》图书的出版能够服务于我国生命科学的发展需要，同时热忱欢迎从事和关心生命科学的广大科技人员不仅对已出版图书提供宝贵意见和建议，也能对系列图书的后续题目设计贡献良策或推荐作者，以便我们能够集思广益，将这一系列图书沿着可持续发展的方向不断丰富品种，推陈出新。
　　谨向所有关心和热爱生命科学，为生命科学的发展孜孜以求的科学工作者致以崇高的敬意！
　　祝愿我国的科技事业如生命之树根深叶茂，欣欣向荣！
　　化学工业出版社生物·医药出版分社

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