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刘国琴 等 编

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• 蛋白质组学
• 蛋白质化学
• 分子生物学
• 生物化学
• 实验技术
• 生物技术
• 生命科学
• 蛋白质分析
• 蛋白质表达
• 蛋白质纯化

出版社： 中国农业大学出版社

ISBN：9787565504273

版次：1

商品编码：10859905

包装：平装

开本：16开

出版时间：2011-10-01

用纸：胶版纸

页数：218

字数：263000

正文语种：中文

内容简介

《现代蛋白质实验技术》有以下几个特点：①实验项目内容充实，技术先进。所选实验项目主要来自编写者多年的教学经验和科研积累，除传统蛋白质实验技术如SDS-PAGE、免疫印迹、双向电泳、离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析、酶动力学分析等外，还包括凝胶阻滞电泳、质谱技术、酵母双杂交、Pull—down、Far—western、双分子荧光互补、蛋白质体外磷酸化、蛋白质结晶、抗体纯化、药物筛选等。②实验技术信息量丰富，参考价值高。书中除了39个实验项目外，还有针对性地编写了33个实验辅助说明穿插在有关实验中，如微升量级样品的透析、杂交膜的选择、常见蛋白酶抑制剂的使用与保存、包涵体蛋白的复性、融合标签的切割、Ni填料的再生、显色后NC膜上蛋白质条带的再利用、免疫印迹中的ECL检测法、激发光谱与发射光谱等。③内容编写精练、易懂，实用性强。《现代蛋白质实验技术》编者为具有多年实验教学经验的教师和掌握蛋白质先进技术的科研人员，其通力合作保证了实验教材的编写质量。该书适合作为生命科学专业高年级本科生实验教材，也适合生命科学相关专业研究生使用。

目录

第一部分 蛋白质鉴定
实验一 SDS-PAGE测定蛋白质分子质量
实验辅助说明1:SDS一样品缓冲液及蛋白质样品处理
实验二 SDS-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳
实验辅助说明2:蛋白质分子质量标准
实验三 利用非变性凝胶电泳分析蛋白质寡聚体
实验辅助说明3:电泳干胶制备
实验四 血清蛋白的聚丙烯酰胺凝胶双向电泳分析(非预制胶)
实验辅助说明4:预制胶条
实验五 利用凝胶阻滞实验(EMSA)分析转录因子
实验辅助说明5:生物素化与亲和素
实验六 凝胶过滤层析法鉴定蛋白质分子质量
实验辅助说明6:层析凝胶使用后的长期保存
实验七 MALDl-TOF-MS质谱法鉴定蛋白质
实验辅助说明7:质谱分析用蛋白质样品制备注意事项
实验八 叶绿素蛋白复合物的提取与光谱学测定
实验辅助说明8:激发光谱与发射光谱
实验九 微丝结合蛋白的结合常数测定
实验十 肌动蛋白聚合动力学分析(光散射法)
实验十一 蛋白质浓度(或含量)的测定

第二部分 蛋白质表达与分离纯化
实验十二 His-tag融合蛋白的原核表达及纯化
实验辅助说明9:抗原决定簇在重组蛋白中的应用
实验辅助说明10:Ni2+亲和填料的再生与保存
实验十三 His-tag融合蛋白可溶性表达的快速微量检测
实验辅助说明11:包涵体蛋白的复性
实验辅助说明12:常见蛋白酶抑制剂的使用与保存

实验十四 绿色荧光蛋白的重组表达与纯化
实验辅助说明13：GFP的金属离子螯合层析纯化
实验十五 蛋白质重组表达的可视化定量方法
实验辅助说明14：菌体的不同裂解方法
实验十六 GST融合蛋白的表达与亲和纯化
实验辅助说明15：用蛋白酶切除蛋白标签
实验十七 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达外源蛋白
实验辅助说明16：昆虫细胞培养
实验十八 PEG介导拟南芥叶肉原生质体中外源蛋白的瞬时表达
实验辅助说明17：常用荧光蛋白分子波长特性
实验十九 亲和层析法分离青豌豆凝集素
实验辅助说明18：透析袋的处理
实验辅助说明19：微升量级蛋白质样品的透析
实验二十 蛋白质离子交换层析
实验辅助说明20：离子交换剂的种类与再生
实验二十一 DNA亲和柱的制备和DNA结合蛋白的纯化
实验辅助说明21：蛋白质电泳胶的银染色法
实验二十二 利用蔗糖密度梯度超速离心分离蛋白质
实验辅助说明22：连续性蔗糖密度梯度制备
实验二十三 猪脑微管蛋白的制备
实验二十四 兔骨骼肌肌动蛋白的制备
实验二十五 蛋白质结晶--悬滴法
实验辅助说明23：载片的硅烷化
实验辅助说明24：座滴法和三明治滴法培养蛋白质晶体
实验二十六 蛋清溶菌酶的纯化以及结晶
实验辅助说明25：蛋清中主要蛋白的特性

第三部分 酶活性分析
实验二十七 果实菠萝蛋白酶的凝胶过滤纯化与活性分析
实验二十八 果实菠萝蛋白酶动力学常数的测定
实验二十九 激酶与底物的体外磷酸化测定
实验辅助说明26：放射性同位素在生物学研究中的应用及辐射防护
……
第四部分 蛋白质免疫化学与蛋白质互作
附录一 蛋白质分子质量标准
附录二 硫酸铵饱和度常用表
附录三 常用缓冲液的配制
附录四 层析填料
附录五 细胞破碎方法

前言/序言

现代蛋白质实验技术 书籍简介： 主题聚焦：蛋白质的结构、功能与相互作用研究 本书是一部系统阐述现代蛋白质科学研究核心技术的专业著作。它深入剖析了从蛋白质的发现、分离纯化到结构解析及功能机制探索的全过程所依赖的关键实验平台与操作规范。本书内容涵盖了蛋白质组学的前沿方法、蛋白质结构生物学的经典与新兴技术，以及功能验证的分子生物学工具。 第一部分：蛋白质的获取与纯化——精准分离的基石 本部分详尽介绍了获取高质量、高纯度蛋白质样品所必需的生物化学与分离科学技术。 细胞裂解与初步分离： 详细讲解了不同组织和细胞类型（如细菌、酵母、哺乳动物细胞）的有效裂解策略，包括机械法、酶解法和化学裂解法的适用条件与优化参数。重点阐述了如何最大程度地保持目标蛋白质的天然活性，避免蛋白酶降解和非特异性聚集。 层析技术的高阶应用： 覆盖了蛋白质纯化领域的核心技术——层析。内容不仅包括亲和层析（Affinity Chromatography，特别是基于His-tag、GST-tag或生物素化的应用）、离子交换层析（Ion Exchange Chromatography）和凝胶过滤层析（Size Exclusion Chromatography）的基础原理，更深入探讨了多维层析策略的构建。例如，如何结合两种或三种不同的层析模式，实现对复杂蛋白质混合物中目标蛋白的高效分离和脱盐纯化。对高分辨率的毛细管电泳（Capillary Electrophoresis, CE）在纯化验证中的应用也进行了介绍。 膜蛋白的特殊处理： 鉴于膜蛋白研究的复杂性，本书专门开辟章节讨论膜蛋白的稳定化和纯化。包括去垢剂（如Detergents）的选择、脂质体构建技术以及利用表面展示系统（Surface Display）进行功能性筛选的方法。 第二部分：蛋白质结构解析——探究分子构象的“显微镜” 结构信息是理解蛋白质功能的关键。本部分聚焦于确定蛋白质三维结构的主流技术及其最新进展。 X射线晶体学： 从蛋白质结晶的优化条件筛选（如微重力结晶、受限体积法）到数据采集和结构解析（包括分子置换法、同源晶体法）。特别强调了弱相互作用蛋白复合物的共晶策略以及解决晶体孪晶问题的实用技术。 冷冻电子显微镜（Cryo-EM）： 详细阐述了从样品制备（铺膜、冷冻）、图像采集到三维重建的完整流程。重点讨论了单颗粒分析（Single Particle Analysis, SPA）在解析大分子机器和膜蛋白复合物结构中的巨大优势，以及如何处理低信噪比数据和进行高分辨率重构。 核磁共振波谱学（NMR）： 针对中小型蛋白质和动态研究，系统介绍了多维核磁技术（如2D/3D HSQC, TOCSY, NOESY）的设置与数据解释。着重讲解了如何利用NMR研究蛋白质的柔性区域、溶液中的相互作用界面以及构象变化。 第三部分：蛋白质功能、修饰与相互作用的检测 纯化和结构获取后，必须通过功能性实验来验证其生物学意义。 酶活性的定量分析： 涵盖了针对氧化还原酶、激酶、磷酸酶等各类酶的标准测活方法，包括实时监测法、耦合反应法和底物消耗测定法。书中提供了多个常用底物和抑制剂的实验参数参考。 蛋白质的翻译后修饰（PTMs）分析： 详细介绍了磷酸化、糖基化、泛素化等关键修饰的识别与定位技术。包括使用特异性抗体进行免疫印迹（Western Blotting）的优化、亲和富集技术（如金属离子螯合亲和层析IMAC用于磷蛋白富集），以及高级质谱技术（如定性与定量磷酸肽谱分析）的应用。 蛋白质-蛋白质相互作用（PPIs）研究： 本部分汇集了体内（In Vivo）和体外（In Vitro）研究PPIs的工具集： 1. 酵母双杂交（Y2H）系统： 经典的筛选方法及其在解决“张量”问题（Tension Problem）上的改进方案。 2. 荧光互补技术（FRET/BRET）： 用于实时、动态监测细胞内相互作用的距离依赖性检测。 3. 免疫共沉淀（Co-IP）与质谱联用： 鉴定蛋白质复合物组成的全景方法，强调了洗脱条件的优化以减少非特异性结合。 4. 表面等离子共振（SPR）与生物层干涉测量（BLI）： 用于定量测定结合动力学参数（$k_{on}, k_{off}, K_D$）的体外高精度方法。 第四部分：蛋白质工程与定向进化 本书最后一部分着眼于蛋白质的改造与应用，是实现生物技术目标的关键。 定向进化策略： 详细介绍了基于DNA的随机突变（如点突变、错误倾向PCR）和基于功能筛选（如噬菌体展示、酵母展示）相结合的方法，用于提高酶的活性、稳定性和底物特异性。 理性设计与位点定向突变： 基于结构信息对目标残基进行精确修改的原理和实施步骤，包括如何利用计算工具辅助设计。 表达系统的选择与优化： 比较了原核（大肠杆菌）、真核（昆虫细胞、哺乳动物细胞）以及重组酵母系统在表达复杂、糖基化或大分子蛋白方面的优劣，并提供了提高重组蛋白表达产量的培养基优化和共表达策略。 目标读者： 本书适合生物化学、分子生物学、生物物理学及生物工程领域的研究生、博士后研究人员，以及在制药和生物技术行业从事蛋白质研发与生产的专业技术人员。它不仅是理论指导，更是实验操作中的实用手册。

评分☆☆☆☆☆

我对《现代蛋白质实验技术》这本书的初印象，是其名称所传达出的那种“与时俱进”的科学精神。我是一名在生物制药行业工作的技术人员，日常工作中需要接触到大量的与蛋白质相关的生产和质量控制环节。虽然我的工作主要集中在应用层面，但对基础的实验技术有深入的了解，能够帮助我更好地理解生产过程中的原理，发现潜在的问题，并提出改进方案。《现代蛋白质实验技术》听起来就像是一本能够提供最新、最前沿技术信息的手册。我尤其对书中关于蛋白质标记和修饰的部分产生了浓厚的兴趣。在药物研发过程中，对蛋白质进行标记，例如荧光标记或同位素标记，对于追踪药物在体内的分布、代谢以及与靶点的相互作用至关重要。同时，了解如何对蛋白质进行化学修饰，以改善其稳定性、生物利用度或靶向性，也是我们工作中常会遇到的课题。我希望书中能够详细介绍各种蛋白质标记策略的原理、方法、试剂选择以及优缺点，并能提供一些在实际生产和研发中应用这些技术的经验和注意事项。此外，书中关于蛋白质的定量分析技术，例如ELISA、Western Blot以及质谱分析等，也是我非常关注的内容。准确的蛋白质定量是药物质量控制的基础，我希望这本书能够提供这些技术的最新进展和最佳实践。这本书，无疑将成为我工作中不可或缺的参考书，帮助我在快速发展的生物制药领域保持领先。

评分☆☆☆☆☆

这本书的出版，对我来说，就像是打开了一个通往精密科学世界的新窗口。《现代蛋白质实验技术》这个书名本身就带着一种严谨和前沿的气息。我是一名对生物化学有浓厚兴趣的学生，虽然我可能还没有机会亲自操作这些复杂精密的实验，但了解它们是如何进行的，以及它们能够揭示哪些关于生命本质的信息，对我来说非常有吸引力。我特别关注目录中关于蛋白质结构解析的部分。理解蛋白质的三维结构是理解其功能的基础，而像是X射线衍射、核磁共振（NMR）和冷冻电子显微镜（Cryo-EM）这样的技术，无疑是揭示蛋白质精妙结构的利器。我希望书中能够详细讲解这些技术的基本原理，以及它们在解析蛋白质结构时各自的优势和局限性。例如，NMR如何“看到”蛋白质在溶液中的状态，而Cryo-EM又如何能够解析那些曾经难以结晶的大型蛋白质复合物的结构，这些都让我觉得充满科技的魅力。我期待书中能够通过生动的图示和清晰的语言，帮助我理解这些高精尖技术的背后逻辑，以及它们是如何一步步帮助科学家们构建出蛋白质的精确三维模型。这本书，无疑为我提供了一个学习和了解现代生物技术前沿的绝佳机会，让我能够站在巨人的肩膀上，远眺生命科学的未来。

评分☆☆☆☆☆

这本书的书名是《现代蛋白质实验技术》，虽然我还没有来得及深入阅读，但从它的封面设计和内容目录来看，就已经深深吸引了我。我是一名生物科学的研究生，目前正在进行一项关于蛋白质功能的研究，而这本书显然与我的研究方向高度契合。我特别期待书中关于蛋白质纯化和表达的部分，因为这是我实验过程中常常遇到的瓶颈。目录中列出了多种层析技术，包括亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析，并详细介绍了它们的原理、操作步骤和应用实例。我一直对如何高效地分离和纯化特定目标蛋白感到困惑，相信这本书能够提供系统的指导和实用的技巧，帮助我优化实验方案，提高蛋白纯度。此外，书中关于蛋白质相互作用研究的技术，如酵母双杂交、Co-IP和Surface Plasmon Resonance (SPR)，也让我跃跃欲试。理解蛋白质之间的相互作用对于揭示生命过程的奥秘至关重要，而这些先进的技术能够为我提供强大的工具。我尤其对SPR技术感到好奇，它能够实时、无标记地检测分子间的结合动力学，这对于我研究的蛋白-蛋白相互作用和蛋白-配体结合非常有价值。我希望这本书能够详细讲解SPR的实验设计、数据分析以及常见问题的解决办法，让我在实验室中能够更自信地运用这项技术。总的来说，这本书似乎是一本集理论与实践于一体的宝藏，我迫不及待地想通过它来提升我的实验技能，并将其中的知识应用到我的研究中。

评分☆☆☆☆☆

作为一名即将步入科研殿堂的本科生，我对《现代蛋白质实验技术》这本书的期待是极为务实的。《现代蛋白质实验技术》这个书名精准地概括了这本书的核心内容，这正是我目前最迫切需要的知识。我的毕业论文课题涉及到对某个关键酶的活性进行优化，而酶本身就是一种蛋白质，其活性的调控与它的稳定性和构象变化息息相关。因此，书中关于蛋白质稳定性分析和构象变化研究的技术，对我来说具有直接的指导意义。我尤其关注目录中关于差示扫描量热法（DSC）和圆二色谱（CD）的部分。DSC能够测量蛋白质在加热过程中的能量变化，从而评估其热稳定性，这对于理解酶在不同温度下的活性差异至关重要。而CD光谱则能够提供蛋白质二级结构的信息，比如α-螺旋和β-折叠的比例，这对于分析环境因素（如pH、离子强度或变性剂）对酶构象的影响非常有帮助。我希望书中能够提供详细的操作流程，包括样品制备、仪器参数设置以及数据解读的步骤。更重要的是，我期待书中能够包含一些案例分析，展示如何利用这些技术来解释实验现象，并为后续的实验设计提供思路。这本书，将是我解决毕业论文难题的得力助手，也必将为我未来的科研道路打下坚实的基础。

评分☆☆☆☆☆

作为一个对生命科学领域充满好奇心的普通读者，我被《现代蛋白质实验技术》这个书名所吸引，虽然我对具体的实验技术了解不多，但蛋白质在生命活动中的重要性早已深入人心。这本书的出版，对我来说就像打开了一扇通往微观世界的大门，让我有机会窥探那些构成生命的基石。我对外包装的设计颇为欣赏，简洁而又不失专业感，给人一种严谨治学的印象。虽然我不是专业研究人员，但我对书中可能涉及到的“如何让一个看不见的分子‘显形’，并观察它的形态和行为”这样的概念非常感兴趣。例如，书中可能会介绍一些利用荧光标记或显微成像技术来观察蛋白质在细胞内的分布和动态变化的方法，这对于理解细胞是如何运作的，以及疾病是如何发生的，具有非凡的意义。我希望这本书能够用一种相对易懂的方式，为我解释这些复杂的概念，让我能够理解科学家们是如何一步步揭示蛋白质的秘密的。我对于那些能够“捕捉”到蛋白质“工作”时的场景的技术，比如利用特定的抗体来定位蛋白质，或者通过基因工程手段在蛋白质上添加“标签”以便追踪，感到非常着迷。这本书，我相信能够满足我这种非专业人士对科学探索的渴望，让我能够对蛋白质在生命科学中的角色有更深刻的认识，或许还能激发我未来学习相关知识的兴趣。

评分☆☆☆☆☆

中文的 我真的还没来的及看，先评论吧

评分☆☆☆☆☆

大品牌使用者多

评分☆☆☆☆☆

《现代蛋白质实验技术》有以下几个特点：①实验项目内容充实，技术先进。所选实验项目主要来自编写者多年的教学经验和科研积累，除传统蛋白质实验技术如SDS-PAGE、免疫印迹、双向电泳、离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析、酶动力学分析等外，还包括凝胶阻滞电泳、质谱技术、酵母双杂交、Pull—down、Far—western、双分子荧光互补、蛋白质体外磷酸化、蛋白质结晶、抗体纯化、药物筛选等。②实验技术信息量丰富，参考价值高。书中除了39个实验项目外，还有针对性地编写了33个实验辅助说明穿插在有关实验中，如微升量级样品的透析、杂交膜的选择、常见蛋白酶抑制剂的使用与保存、包涵体蛋白的复性、融合标签的切割、Ni填料的再生、显色后NC膜上蛋白质条带的再利用、免疫印迹中的ECL检测法、激发光谱与发射光谱等。③内容编写精练、易懂，实用性强。《现代蛋白质实验技术》编者为具有多年实验教学经验的教师和掌握蛋白质先进技术的科研人员，其通力合作保证了实验教材的编写质量。该书适合作为生命科学专业高年级本科生实验教材，也适合生命科学相关专业研究生使用。

评分☆☆☆☆☆

很适合蛋白和抗体类技术员

评分☆☆☆☆☆

很适合蛋白和抗体类技术员

评分☆☆☆☆☆

《现代蛋白质实验技术》有以下几个特点：①实验项目内容充实，技术先进。所选实验项目主要来自编写者多年的教学经验和科研积累，除传统蛋白质实验技术如SDS-PAGE、免疫印迹、双向电泳、离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析、酶动力学分析等外，还包括凝胶阻滞电泳、质谱技术、酵母双杂交、Pull—down、Far—western、双分子荧光互补、蛋白质体外磷酸化、蛋白质结晶、抗体纯化、药物筛选等。②实验技术信息量丰富，参考价值高。书中除了39个实验项目外，还有针对性地编写了33个实验辅助说明穿插在有关实验中，如微升量级样品的透析、杂交膜的选择、常见蛋白酶抑制剂的使用与保存、包涵体蛋白的复性、融合标签的切割、Ni填料的再生、显色后NC膜上蛋白质条带的再利用、免疫印迹中的ECL检测法、激发光谱与发射光谱等。③内容编写精练、易懂，实用性强。《现代蛋白质实验技术》编者为具有多年实验教学经验的教师和掌握蛋白质先进技术的科研人员，其通力合作保证了实验教材的编写质量。该书适合作为生命科学专业高年级本科生实验教材，也适合生命科学相关专业研究生使用。

评分☆☆☆☆☆

只是初级的大学工具书，让人失望

评分☆☆☆☆☆

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