正版 分子克隆实验指南（第四版）（上中下册）格林分子克隆技术基因转移分析策略遗传学分子细 pdf epub mobi txt 电子书 下载 2025

简体网页||繁体网页

☆☆☆☆☆

[美] MR格林，J萨姆布鲁克编陈薇，杨晓明译 著

图书标签:

• 分子克隆
• 基因转移
• 遗传学
• 分子生物学
• 实验指南
• 生物技术
• 克隆技术
• 基因分析
• 格林分子克隆
• 上中下册

店铺： 中图天下图书专营店

出版社： 科学出版社

ISBN：9787030519979

商品编码：28435239747

包装：平装

开本：16

出版时间：2017-03-01

商品参数

分子克隆实验指南（第四版）（上中下册）
	定价	598.00
	出版社	科学出版社
	版次	1
	出版时间	2017年03月
	开本	16开
	作者	[美] M.R.格林，J.萨姆布鲁克 编；陈薇，杨晓明 译
	装帧	平装
	页数
	字数
	ISBN编码	9787030519979

内容介绍

　　分子克隆技术30多年来一直是生命科学领域实验室技术的基础。冷泉港实验室出版的《分子克隆实验指南》一书拥有的可靠性和*性，使本书成为业内*流行、*具影响力的实验室操作指南。第四版的《分子克隆实验指南》保留了之前版本中备受赞誉的细节和准确性，10个原有的核心章节经过更新，反映了标准技术的发展和创新，并介绍了一些前沿的操作步骤。同时还修订了第三版中的核心章节，以突出现有的核酸制备和克隆、基因转移及表达分析的策略和方法，并增加了12个新章节，专门介绍*激动人心的研究策略，包括利用 DNA 甲基化技术和染色质免疫沉淀的表观遗传学分析、RNAi、新一代测序技术，以及如何处理数据生成和分析的生物信息学，例如介绍了分析工具的使用，如何比较基因和蛋白质的序列，鉴定多个基因的常见表达模式等。本书还保留了必不可少的附录：包括试剂和缓冲液、常用技术、检测、一般安全原则和危险材料。任何使用分子生物学技术的基础研究实验室都将因拥有一册《分子克隆实验指南》而受益。本书可作为学习遗传学、分子细胞生物学、发育生物学、微生物学、神经科学和免疫学等学科的重要指导，可供生物学、医药卫生，以及农、林、牧、渔、检验检疫等方面的科研、教学与技术人员参考。

　　Originally published in English as Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Fourth Edition, by MichaelR.Green and Joseph Sambrook ? 2012 Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NewYork, USA? 2017 Science Press. Print in China.Authorized Simplified Chinese translation of the English edition ? 2012 Cold Spring Harbor LaboratoryPress. This translation is published and sold by permission of Cold Spring Harbor Laboratory Press, the owner of all rights to publish and sell the same.

暂时没有目录，请见谅！

《生物化学与分子生物学前沿技术：方法与应用》 导言： 在生命科学飞速发展的今天，对生命体内部复杂机制的理解已不再仅仅停留在理论层面，而是越来越依赖于精准、高效的实验技术。本手册旨在为生物化学、分子生物学、细胞生物学以及生物技术领域的科研工作者、高年级本科生和研究生提供一套全面、系统的实验技术指引。本书聚焦于当前研究热点和基础平台技术，涵盖了从基础的蛋白质和核酸操作到复杂的细胞成像和基因编辑策略，力求在理论阐述与实际操作之间架起坚实的桥梁。 第一篇：基础分子生物学技术精要 本篇致力于巩固分子生物学实验的基石。我们将深入探讨核酸的提取、纯化与定量，这是后续所有分子实验的前提。 第一章：高质量核酸的获取 动植物组织及细胞核酸提取的优化： 详细阐述如何针对不同组织（如富含多糖的植物、高脂的动物组织或易降解的临床样本）选择最合适的裂解缓冲液和去蛋白/去多糖策略。重点介绍酚氯仿抽提法的操作细节控制以及商业化试剂盒的适用性比较。 高纯度RNA的制备与稳定性维护： 强调RNase污染的预防，包括无菌操作规范和特定灭菌步骤。针对不同RNA应用（如qRT-PCR、测序文库制备）对RNA质量的要求进行量化标准说明。 第二章：PCR及分子克隆的替代方案 本章聚焦于不依赖传统限制性内切酶连接的核酸扩增与组装技术，以应对日益增长的复杂基因构建需求。 高保真PCR技术的选择与故障排除： 比较不同DNA聚合酶（如Pfu、Q5等）的保真性、延伸速度及对模板的适应性。探讨退火温度梯度优化（Touchdown PCR）在提高特异性方面的应用。 基于同源重组的构建策略（如Gibson Assembly）： 详细解析该技术的反应原理，包括引物设计的关键考量点（重叠区长度与GC含量）。提供操作流程图及常见失败原因的排查清单，例如片段摩尔比失衡问题。 限制性内切酶的现代应用： 虽然强调替代方法，但本节仍需回顾“一剪子”和“多酶切”策略在特定场景下的高效性，并介绍新型限制酶的特性。 第二篇：蛋白质组学基础与蛋白质相互作用分析 理解蛋白质的功能，必须精确地分离、鉴定并探究其在细胞网络中的地位。本篇专注于蛋白质的制备、分离和相互作用研究。 第三章：蛋白质分离、纯化与定量 多维蛋白分离技术： 深入讲解SDS-PAGE的原理及垂直电泳系统的优化。重点介绍等电聚焦电泳（IEF）在高分辨率分离中的应用，及其与双向电泳（2D-PAGE）的结合。 亲和层析的进阶应用： 不仅仅是Ni-NTA的使用，本章将详细介绍标签选择（如GST、FLAG、SBP）对下游实验（如磷酸化分析或功能研究）的影响。讨论洗脱条件（pH、咪唑浓度）的精细调控。 蛋白质的稳定化与储存： 探讨添加保护剂（如抑肽酶、DTT/$eta$-巯基乙醇）的最佳浓度范围，以及冷冻保存对不同类型蛋白质（膜蛋白与可溶性蛋白）的适用性。 第四章：蛋白质相互作用的体内外探究 酵母双杂交（Y2H）系统的优化： 讨论构建高通量文库的挑战，以及筛选假阳性克隆的策略（如补充筛选标记物）。强调AD/BD载体的选择对互作强度的影响。 免疫共沉淀（Co-IP）的信号增强： 详细解析洗涤缓冲液中去垢剂（如NP-40、Triton X-100）浓度对弱相互作用捕获的平衡点。讨论如何通过交联剂（如DSS）固定瞬时结合。 表面等离子共振（SPR）的动力学分析： 介绍SPR用于测定蛋白质结合常数 ($K_D$) 和反应速率 ($k_{on}, k_{off}$) 的基础原理和数据拟合方法。 第三篇：细胞生物学与成像技术前沿 现代生物学研究越来越依赖对活细胞内动态过程的实时观察。本篇聚焦于细胞处理和高分辨率成像技术。 第五章：细胞培养与转染效率的提升 原代细胞的培养与传代： 详细说明原代神经元、肝细胞或干细胞培养所需的特定生长因子、基质（如Matrigel或Fibronectin）的选择和铺板密度控制。 高效转染策略的选择与优化： 对比脂质体介导、电穿孔（Electroporation）和病毒转导（Lentivirus/AAV）的优缺点。针对难转染细胞系（如悬浮细胞）提供电穿孔参数的优化指南。 稳转株的筛选与鉴定： 阐述嘌呤霉素、潮霉素等抗生素的筛选浓度确定过程，以及如何利用Western Blot确认稳定表达的蛋白质水平。 第六章：荧光显微镜与活细胞成像 荧光探针的选择与光漂白控制： 比较小分子染料（如Hoechst）、荧光蛋白（GFP及其衍生物）和量子点在不同实验场景下的适用性。提供降低光毒性和光漂白的技术（如低速采集、氧气清除剂的使用）。 共聚焦显微镜的应用： 解释共聚焦成像如何通过针孔消除离焦光，以获得高分辨率的Z轴截面图像。指导Z轴扫描步长和激光功率的匹配。 FRET与FRAP在功能分析中的应用： 介绍荧光共振能量转移（FRET）如何用于检测分子间小于10纳米的接近程度。阐述荧光漂白恢复（FRAP）如何量化分子在特定区域的动态迁移率。 第四篇：基因组编辑与核酸功能研究 本篇聚焦于对遗传物质进行精确修饰和功能解析的技术。 第七章：CRISPR/Cas9系统的精确操作 sgRNA的设计与验证： 介绍脱靶效应预测工具的使用，以及如何通过体外转录或商业化购买高纯度sgRNA。强调设计时避开SNP区域的重要性。 基因敲除与敲入的策略实施： 针对基因敲除（Knockout）的随机插入/缺失（Indel）检测，详细说明T7E1酶法和高通量测序分析流程。对于精确敲入（Knock-in），重点讨论同源修复模板（HDR Template）的构建方式（质粒vs寡核苷酸）。 碱基编辑与先导编辑（Prime Editing）： 介绍这些新型工具在避免双链断裂（DSB）方面的优势，并提供特定编辑位点选择的考虑因素。 第八章：功能性核酸分析与调控 siRNA与shRNA的干扰效率评估： 不仅关注靶基因mRNA的降解，更强调通过Western Blot确认目标蛋白水平的下降。探讨高通量筛选中siRNA文库的制备与去条带化（Deconvolution）。 miRNA功能研究的挑战： 描述如何利用miRNA模拟物（Mimics）和抑制剂（Inhibitors）来精确调控细胞内水平，并利用荧光报告系统验证靶基因的直接调控关系。 总结： 本书力求以实验操作者的视角，梳理从样本处理到复杂数据分析的全流程，强调技术选择背后的科学逻辑与潜在的实验陷阱，是推动生命科学研究向更深层次发展的实用工具书。

评分☆☆☆☆☆

拿到这套书的时候，我就被它厚重实在的质感吸引住了。封面设计简洁明了，但内页的印刷和排版简直是教科书级别的典范。我立刻翻阅了其中一册，发现内容组织得极其有逻辑性，从基础的概念引入到复杂的实验步骤，每一步都讲解得丝丝入扣，仿佛作者就在我身边手把手地教我。特别是那些流程图和示意图，精准地捕捉了分子生物学实验中那些抽象而关键的环节，对于我这种需要反复核对操作细节的人来说，简直是救星。我记得有一次在设计一个基因表达载体时遇到了瓶颈，光是参考网上的零散资料就浪费了半天时间，而这本书中关于载体构建的章节，用一种近乎完美的框架梳理了所有需要考虑的限制位点和酶切策略，让我茅塞顿开，立刻找到了问题的症结所在。这本书的价值不仅仅在于它提供了“怎么做”，更在于它深入探讨了“为什么这样做”背后的分子机制和理论基础，使得读者在操作层面和理论深度上都能得到极大的提升，这才是真正严谨的科学著作所应有的风范。

评分☆☆☆☆☆

坦白说，阅读这套书的过程更像是一场智力的挑战与乐趣的结合。它不仅仅是一本操作手册，更是一部关于生命科学思维方式的深度探讨。书中对不同实验策略背后的科学哲学进行了深入的阐述，比如为什么要选择某个特定的报告基因，或者在设计siRNA序列时需要规避哪些生化特性。这种对“为什么”的深挖，极大地激发了我作为研究者应有的批判性思维。我发现自己不再满足于简单地重复既有步骤，而是开始主动思考如何根据自己的研究体系进行创新性的修改和优化。例如，在讨论基因敲除模型的建立时，书中对CRISPR/Cas9系统的脱靶效应进行了坦诚且详尽的分析，并提供了多种缓解策略，这表明作者在面对前沿技术时保持着极高的科学审慎度，不盲目推崇，而是力求客观公正地评估其潜力和局限性，这种严谨的态度是值得所有科研工作者学习的。

评分☆☆☆☆☆

这本书的详尽程度超出了我此前的任何预期。我之前阅读过一些入门级的分子生物学参考书，它们更多地是停留在概念的介绍上，对于实验细节的处理往往一带而过，导致实际操作中总会遇到各种预料之外的“小插曲”。然而，这套书的精妙之处恰恰在于它对“意外”的预判和应对策略。比如，在谈到PCR产物纯化时，它不仅介绍了常用的柱式纯化法，还详细对比了不同品牌试剂盒的性能差异，并给出了在模板量极低或目的片段极长时应该采取的优化措施。更令人称道的是，它对数据分析和结果判读的章节处理得非常到位，对于电泳图谱中出现的“拖尾”或“杂带”，提供了多角度的故障排除清单，非常实用。我感觉作者团队绝对是经验丰富的一线研究人员，他们把多年来摸爬滚打积累下来的“实战智慧”毫无保留地倾注到了文字中，使得这本书更像是一位随时待命的资深导师，而非冰冷的教材。

评分☆☆☆☆☆

我个人对这种结构化、系统化的知识呈现方式非常偏爱。这套书的编排结构仿佛是一个精心构建的知识迷宫的导览图，清晰地标记了每一条路径的起点、终点和可能的岔路口。上册打下了坚实的理论基础，中册则聚焦于核心的分子克隆技术，例如限制性内切酶的使用规范、连接效率的提升方法等，而下册则明显侧重于更前沿的应用和高级分析，比如基因编辑工具的整合应用和复杂的遗传学分析模型。这种由浅入深、层层递进的组织方式，极大地降低了学习曲线的陡峭程度。即便是初学者，只要能跟上节奏，也能逐步建立起对整个分子生物学实验体系的宏观认知。我尤其欣赏它对实验步骤中“控制变量”的强调，很多关键的成功与否往往取决于那些看似微不足道的缓冲液浓度或孵育温度的微小差异，这本书将这些“魔鬼细节”清晰地罗列出来，避免了读者在实验中走弯路，极大地提高了实验的成功率和可重复性。

评分☆☆☆☆☆

如果用一个词来形容这套书的阅读体验，我会选择“充实”。每一页纸都承载着沉甸甸的知识密度，没有一句废话，没有一处赘述。它的语言风格是典型的学术严谨，但又透着一种资深专家对后学的关怀，讲解清晰有力，避免了晦涩难懂的行话堆砌。我特别留意了它对于生物信息学工具在分子克隆流程中应用的介绍，发现这部分内容与时俱进，紧密结合了当前大数据分析的趋势，清晰地指明了传统湿实验如何与前沿的计算方法进行高效整合。这使得这本书的参考价值远远超出了传统的实验室手册范畴，它成功地架起了基础实验技术与现代生命科学研究范式的桥梁。对于任何希望在分子生物学领域深耕，尤其是在基因功能探索和新型分子工具开发方面有所建树的人来说，这套书无疑是一份不可或缺的、具有长期生命力的知识资产。