分子剋隆實驗指南（第四版平裝版） （美）M.R.格林 科學齣版社 冷泉港實驗室 epub pdf mobi txt 電子書 下載 2024

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商品參數

分子剋隆實驗指南（第四版平裝版）
	曾用價	598.00
	齣版社	科學齣版社
	版次	1
	齣版時間	2017年03月
	開本
	作者	（美）M.R.格林
	裝幀	平裝
	頁數	1656
	字數	3000
	ISBN編碼	9787030519979

內容介紹
分子剋隆技術30多年來一直是全球生命科學領域實驗室專業技術的基礎。冷泉港實驗室齣版社齣版的《分子剋隆實驗指南》一書擁有的可靠性和**性，使本書成為業內*流行、*具影響力的實驗室操作指南。
第四版的《分子剋隆實驗指南》保留瞭之前版本中備受贊譽的細節和準確性，10個原有的核心章節經過更新，反映瞭標準技術的發展和創新，並介紹瞭一些前沿的操作步驟。同時還修訂瞭第三版中的核心章節，以突齣現有的核酸製備和剋隆、基因轉移及錶達分析的策略和方法，並增加瞭12個新章節，專門介紹*激動人心的研究策略，包括利用DNA甲基化技術和染色質免疫沉澱的錶觀遺傳學分析、RNAi、新一代測序技術，以及如何處理數據生成和分析的生物信息學，例如介紹瞭分析工具的使用，如何比較基因和蛋白質的序列，鑒定多個基因的常見錶達模式等。本書還保留瞭必不可少的附錄，包括試劑和緩衝液、常用技術、檢測係統、一般安全原則和危險材料。

目錄
目錄
上冊
第1章 DNA的分離及定量 1
導言 2
方案1 SDS堿裂解法製備質粒DNA：少量製備 9
方案2 SDS堿裂解法製備質粒DNA：大量製備 12
方案3 從革蘭氏陰性菌（如Ecolz中分離DNA 15
方案4 乙醇法沉澱DNA 17
方案5 異丙醇法沉澱DNA 21
方案6 用微量濃縮機進行核酸的濃縮和脫鹽 22
方案7 丁醇抽提法濃縮核酸 23
方案8 聚乙二醇沉澱法製備Ml3噬菌體單鏈DNA 24
方案9 Ml3噬菌體鋪平闆 27
方案10 Ml3噬菌體液體培養 30
方案11 Ml3噬菌體雙鏈（復製型）DNA的製備 32
方案12 利用有機溶劑分離純化高分子質量DNA 35
方案13 用蛋白酶K和苯酚從哺乳動物細胞中分離高分子質量DNA 37
方案14 一步法同時提取細胞或組織中的DNA、RNA和蛋白質 43
方案15 從鼠尾或其他小樣本中製備基因組DNA 46
替代方案：不使用有機溶劑從鼠尾分離DNA 48
替代方案：一管法從鼠尾中分離DNA 49
方案16 快速分離酵母DNA 50
方案17 微型凝膠電泳後使用溴化乙錠(EB)估算條帶中DNA數量 52
方案18 利用Hoechst33258通過熒光分析儀估算DNA濃度 53
方案19 用PicoGreen定量溶液中的DNA 55
信息欄 56
第2章 DNA分析 62
導言 63
方案1 瓊脂糖凝膠電泳 73
方案2 瓊脂糖凝膠中DNA的染色檢測 76
方案3 聚丙烯酰胺凝膠電泳 80
方案4 聚丙烯酰胺凝膠中DNA的染色檢測 85
方案5 聚丙烯酰胺凝膠中DNA的放射自顯影檢測 86
方案6 堿性瓊脂糖凝膠電泳 87
附加方案：堿性瓊脂糖凝膠的放射自顯影 90
方案7 成像：放射自顯影和感光成像 91
方案8 用玻璃珠從瓊脂糖凝膠中迴收DNA 96
方案9 低熔點瓊脂糖凝膠中DNA的迴收：有機溶劑抽提法 98
方案10 聚丙烯酰胺凝膠中DNA片段的迴收：壓碎與浸泡法 101
方案11 Southern印跡 103
方案12 Southern印跡：DNA從一塊瓊脂糖凝膠同時嚮兩張膜轉移 110
方案13 采用放射性標記探針對固定在膜上的核酸DNA進行Southern雜交 112
附加方案：從膜上洗脫探針 117
信息欄 119
第3章 質粒載體剋隆與轉化 122
導言 123
方案1 製備和轉化感受態大腸杆菌的Hanahan方法：高效轉化策略 126
方案2 製備和轉化感受態大腸杆菌的Inoue方法：“超級感受態”細胞 131
方案3 大腸杆菌的簡單轉化：納米顆粒介導的轉化 135
替代方案：一步法製備感受態大腸杆菌：在同一溶液中轉化和儲存細菌細胞 136
方案4 電穿7L法轉化大腸杆菌 138
方案5 質粒載體剋隆：定嚮剋隆 143
方案6 質粒載體剋隆：平末端剋隆 145
方案7 質粒DNA的去磷酸化 148
方案8 嚮平末端DNA添加磷酸化銜接子／接頭 150
方案9 剋隆PCR産物：嚮擴增DNA的末端添加限製性酶切位點 151
方案10 剋隆PCR産物：平末端剋隆 154
方案11 剋隆PCR産物：製各T載體 157
方案12 剋隆PCR産物：TA剋隆 159
方案13 剋隆PCR産物：TOPO TA剋隆 161
方案14 使用X-Gal和IPTG篩選細菌菌落：a-互補 165
信息欄 167
第4章 Gateway重組剋隆 205
導言 206
方案1 擴增Gatewav載體 210
方案2 製備可讀框入門剋隆和目的剋隆 213
方案3 應用多位點LR剋隆反應製備目的剋隆 219
信息欄 222
第5章 細菌人工染色體及其他高容量載體的應用 223
導言 224
方案1 BAC DNA的小量分離和PCR檢驗 235
方案2 BAC DNA的大量製備和綫性化 238
方案3 通過脈衝電場凝膠電泳檢驗BAC DNA的質量和數量 241
方案4 兩步BAC工程：穿梭載體DNA的製備 242
方案5 A同源臂(A-Box)和B同源臂(B-Box)的製備 244
方案6 剋隆A和B同源臂到穿梭載體 247
方案7 重組穿梭載體的製備和檢驗 249
方案8 通過電穿7L法轉化重組穿梭載體到感受態BAC宿主細胞 251
方案9 共閤體的檢驗和重組BAC剋隆的篩選 253
方案10 一步BAC修飾：質粒製備 256
方案11 A同源臂(A-Box)的製備 259
方案12 剋隆A同源臂到報道穿梭載體 260
方案13 用RecA載體轉化BAC宿主 263
方案14 轉移報道載體到BACiRecA細胞以及共閤體的篩選 265
方案15 釀酒酵母(S.cerevisiae)的生長和DNA製備 267
方案16 酵母DNA的小量製備 269
信息欄 270
第6章 真核細胞RNA的提取、純化和分析 275
導言 276
方案1 從哺乳動物的細胞和組織中提取總RNA 279
替代方案 從小量樣本提取RNA 281
方案2 從斑馬魚胚胎和成體中提取總RNA 282
方案3 從黑腹果蠅提取總RNA 283
方案4 從秀麗隱杆綫蟲中提取總RNA 285
方案5 從釀酒酵母菌中采用熱酸酚提取總RNA 287
方案6 RNA定量和儲存 289
方案7 RNA的乙醇沉澱 295
方案8 通過無RNase的DNaseI處理去除RNA樣品中的DNA汙染 297
方案9 oligo(dT)磁珠法提取poly(A)+mRNA 298
方案10 按照大小分離RNA：含甲醛的瓊脂糖凝膠電泳 308
方案11 根據分子質量大小分離RNA: RNA的尿素變性聚丙烯酰胺凝膠電泳 312
方案12 瓊脂糖凝膠中變性RNA的轄膜和固定 319
替代方案 下行毛細管轉移 323
方案13 聚丙烯酰胺凝膠的電轉移和膜固定 325
方案14 Northern雜交 327
方案15 純化RNA的點雜交和狹縫雜交 330
方案16 用核酸酶Sl對RNA作圖 342
方案17 核糖核酸酶保護分析：用核糖核酸酶和放射性標記的RNA探針對RNA作圖 349
方案18 引物延伸法分析RNA 355
信息欄 359
第7章 聚閤酶鏈反應 363
導言 364
方案1 基礎PCR 375
方案2 熱啓動PCR 380
方案3 降落PCR 383
方案4 高GC含量模闆的PCR擴增 385
方案5 長片段高保真PCR (IA PCR) 390
方案6 反嚮PCR 393
方案7 巢式PCR 397
方案8 mRNA反轉錄産物cDNA的擴增：兩步法RT-PCR 400
方案9 由mRNA的5'端進行序列的快速擴增：5'-RACE 409
方案10 由mRNA的3'端進行序列的快速擴增：3 '-RACE 416
方案11 使用PCR篩選剋隆 422
信息欄 424
第8章 生物信息學 431
導言 432
方案1 使用ucsc基因組瀏覽器將基因組注釋可視化 434
方案2 使用BLAST和ClustalW進行序列比對和同源性檢索 444
方案3 使用Primer3Plus設計PCR引物 450
方案4 使用微陣列和RNA-seq進行錶達序列譜分析 461
方案5 將上億短讀段定位至參考基因組上 472
方案6 識彆ChIP-seq數據集中富集的區域（尋峰） 483
方案7 發現順式調控基序 495
信息欄 503
中冊
第9章 實時熒光聚閤酶鏈反應定量檢測DNA及RNA 509
導言 510
方案1 實時PCR反應用引物和探針濃度的優化 532
方案2 製作標準麯綫 537
方案3 實時熒光PCR定量檢測DNA 540
方案4 實時熒光PCR定量檢測RNA 542
方案5 實時熒光PCR實驗數據的分析和歸一化 545
信息欄 550
第10章 核酸平颱技術 551
導言 552
方案1 即製微陣列 560
方案2 Round AiRoundB DNA擴增 564
方案3 核小體DNA和其他小於500bp的DNA的T7綫性擴增(TIAD) 567
方案4 RNA的擴增 572
方案5 RNA的Cvanine-dUTP直接標記 578
方案6 RNA的氨基烯丙基-dUTP間接標記 581
方案7 用Klenow酶對DNA進行Cyanine-dCTP標記 583
方案8 DNA的間接標記 585
方案9 封閉自製微陣列上的多聚賴氨酸 587
方案10 自製微陣列的雜交 589
第11章 DNA測序 595
導言 596
方案1 毛細管測序質粒亞剋隆的製備 620
方案2 毛細管測序之PCR産物的製備 625
方案3 循環測序反應 627
方案4 全基因組：手工文庫製備 630
方案5 全基因組：自動化的無索引文庫製備 636
附加方案 自動化的文庫製備 642
方案6 全基因組：自動化的帶索引文庫製備 644
方案7 用於Illumina測序的3kb末端配對文庫的製備 651
方案8 用於Illumina測序的8kb末端配對文庫的製備 659
附加方案 AMPure磁珠校準 671
方案9 RNA—Seq:RNA反轉錄為cDNA及其擴增 673
附加方案 RNACleanⅪ’磁珠純化/RNA—Seq前） 679
方案10 液相外顯子組捕獲 680
附加方案 AMPure XP磁珠純化 688
附加方案 瓊脂糖凝膠大小篩選 689
方案11 自動化大小篩選 690
方案12 用SYBR Green-qPCR進行文庫定量 693
方案13 用PicoGreen熒光法進行文庫DNA定量 696
方案14 文庫定量：用Qubit係統對雙鏈或單鏈DNA進行熒光定量 700
方案15 為454測序製備小片段文庫 702
方案16 單鏈DNA文庫的捕獲及emPCR 708
方案17 Rochei454測序：執行一個測序運行 714
方案18 結果有效性確認 721
方案19 測序數據的履量評估 723
方案20 數據分析 724
信息欄 725
第12章 哺乳動物細胞中DNA甲基化分析 729
導言 730
方案1 DNA亞硫酸氫鹽測序法檢測單個核苷酸的甲基化 735
方案2 甲基化特異性聚閤酶鏈反應法檢測特定基因的DNA甲基化 742

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