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內容簡介

植物細胞與組織研究方法是生物類、大農學類的大學生、研究生的一門重要課程，也是一門重要的實驗技術。《植物細胞與組織研究方法》根據編者多年的教學、科研積纍以及實驗技能整理而成。《植物細胞與組織研究方法》主要介紹植物細胞與組織研究中廣泛應用和實用的內容和方法，包括植物製片技術（如石蠟切片、半薄切片、木材切片、徒手切片、印痕技術、離析技術、塗壓技術等）、植物組織與細胞化學、各種顯微技術（如正置顯微技術、倒置顯微技術、熒光顯微技術、體視顯微技術、顯微操作技術等）、圖像采集、圖像處理、全書圖文並茂，既係統地介紹瞭當今植物細胞與組織的研究方法，又突齣瞭實驗技術要點。

目錄

第一篇 植物細胞與組織製片原理
1 植物製片的目的和方法
1.1 植物製片簡介
1.1.1 植物製片目的
1.1.2 植物製片方法
1.2 植物製片常用儀器、用具、藥品
1.3 植物製片一般流程
1.3.1 一般製片
1.3.2 石蠟/半薄切片
1.4 植物製片相關常用技術
1.4.1 清潔技術
1.4.2 封邊與封片（藏）技術
1.4.3 切片刀的磨刀技術
2 植物製片的原理
2.1 選材
2.1.1 材料的選擇
2.1.2 材料的切取
2.2 殺死、固定與保存
2.2.1 殺死、固定與保存
2.2.2 固定的基本原理
2.2.3 常用的固定劑
2.2.4 固定操作注意事項
2.3 洗滌
2.3.1 洗滌的作用
2.3.2 洗滌的方法
2.4 脫水劑與脫水
2.4.1 脫水
2.4.2 常用的脫水劑
2.5 透明劑與透明
2.5.1 透明的作用
2.5.2 常用的透明劑
2.6 製片
2.7 染色劑與染色
2.7.1 染色的發現與染色原理
2.7.2 染色劑的概念與性質
2.7.3 染色劑的種類
2.8 封固與封固劑
2.8.1 水溶性封固劑
2.8.2 糖漿封固劑
2.8.3 樹脂性封固劑
2.8.4 其它封固劑
3 常用染色劑及染色方法
3.1 常用染色劑
3.1.1 蘇木精（Haematoxylin）
3.1.2 洋紅（Carmine）
3.1.3 番紅O（Safranin Y或afranin A）
3.1.4 亮綠（Light Green）
3.1.5 固綠（Fast green）
3.1.6 孔雀綠（Malachite Green）
3.1.7 甲基綠（Methyl Green）
3.1.8 碘綠（Iodine Green）
3.1.9 結晶紫（Crystal Violet）
3.1.10 橘紅G（Orange G）
3.1.11 曙紅（Eosin）
3.1.12 真曙紅（Erythrosin）
3.1.13 中性紅（Neutral red）
3.1.14 酸性品紅（復紅）（Acid fuchsin）
3.1.15 堿性品紅（復紅）（Basic Fuchsin）
3.1.16 剛果紅（Congo Red）
3.1.17 甲苯胺藍（Toluidine blue）
3.1.18 甲基藍（Methyl blue）
3.1.19 亞甲基藍（Methylene Blue trihydrate）
3.1.20 蘇丹Ⅲ（Sudan Ⅲ）
3.1.21 蘇丹Ⅳ（Sudan Ⅳ）
3.1.22 苯胺藍（Cotton Blue）
3.1.23 地衣紅（Orcein）
3.1.24 天青石蘭（Celestine Blue）
3.1.25 苦味酸（Picric Acid）
3.1.26 俾斯麥棕（Basic Brown）
3.1.27 玫瑰紅（Rhodamine）
3.1.28 詹納斯綠（Janus Green）
3.1.29 紅四氮唑（2，3，5�睺riphenyltetra�瞶olium chloride）
3.1.30 間苯三酚（Phloroglucinol dihydrate）
3.2 染色方法
3.2.1 染色方法的種類
3.2.2 常用的染色方法與步驟
3.3 染色中必須注意的幾個問題
3.3.1 染色液濃度
3.3.2 染色溫度與時間
3.3.3 固定液對於染色的影響
3.3.4 染色時應注意的幾個問題
第二篇 植物細胞與組織製片方法
4 石蠟切片法
4.1 取材、固定、保存、洗滌
4.1.1 取材
4.1.2 固定
4.1.3 衝洗
4.2 脫水、透明
4.2.1 脫水
4.2.2 透明
4.3 浸蠟
4.4 包埋
4.4.1 包埋方法
4.4.2 包埋石蠟選擇
4.5 修塊、切片
4.5.1 修塊、粘固
4.5.2 組織切片機的結構及操作步驟
4.5.3 切片注意事項
4.6 粘片、展片、烤片（烘片）
4.7 脫蠟、復水、染色、脫水、透明
4.8 封片
5 半薄切片技術
5.1 水溶性樹脂包埋
5.1.1 GMA包埋法
5.1.2 Quetol 523包埋
5.1.3 JB-4包埋
5.1.4 Lowicryl K4M包埋法
5.2 環氧樹脂包埋法
5.2.1 環氧樹脂包埋的機製和配方
5.2.2 材料洗滌、脫水
5.2.3 滲透與聚閤
5.3 修塊和切片
5.3.1 修塊
5.3.2 切片刀
5.3.3 切片注意事項
5.4 染色
6 非切片製片
6.1 暫時封藏
6.1.1 簡易觀察製片
6.1.2 孢子及花粉粒萌發觀察製片
6.2 整體製片
6.2.1 甘油法
6.2.2 甘油凍膠法
6.2.3 甘油�捕�甲苯法
6.2.4 糖漿法
6.2.5 水封藏法
6.2.6 鬆節油法
6.3 塗壓製片
6.3.1 塗壓法的基本步驟
6.3.2 植物花粉母細胞的塗片法
6.3.3 植物根尖、莖端的壓片法
6.4 離析製片
6.4.1 硝酸�猜然�鉀離析法（Schaltze法）
6.4.2 鉻酸�蠶跛嶗胛齜ǎ═effrey法）
6.4.3 乙酸�補�氧化氫離析法
6.4.4 煮沸法
6.4.5 鹽酸�膊菟嶗胛齜�
6.4.6 氨水離析法
6.4.7 氫氧化鈉離析法
6.4.8 乙醇�慚嗡嶗胛齜�
6.4.9 次氯酸鈉法
6.5 透明製片
6.5.1 乳酸�脖椒油該鞣�
6.5.2 氫氧化鈉透明法
6.5.3 鼕青油透明法
6.5.4 甘油透明法
7 植物細胞與組織顯微測定
7.1 碳水化閤物顯微測定
7.1.1 高碘酸�蠶７蚍從Α�—顯示多糖（澱粉粒及細胞壁縴維素等）
7.1.2 碘�駁饣�鉀反應——顯示澱粉粒
7.1.3 氯化鐵羥胺反應——顯示果膠
7.1.4 氯碘化鋅反應——顯示縴維素
7.1.5 氯代亞硫酸鹽法——顯示木質素
7.1.6 苯胺藍熒光法——顯示胼胝質
7.1.7 亞硫酸鐵反應——顯示單寜
7.1.8 銀還原法——顯示維生素C
7.2 脂類顯微測定
7.2.1 蘇丹染料染色法——顯示全部脂類
7.2.2 Nile藍法——顯示中性脂肪及酸性類脂
7.2.3 鋨酸染色法——顯示中性不飽和脂類
7.2.4 酸性氧化蘇木精法——顯示磷脂
7.2.5 過甲酸�蠶７蚍ā�—顯示不飽和鍵脂類
7.2.6 丙二醇蘇丹法——顯示類脂
7.3 蛋白質的顯微測定
7.3.1 汞�蹭宸永鬥ā�—顯示總蛋白質
7.3.2 茚三酮（或四氧嘧啶）�蠶７蚍從Α�—顯示總蛋白質
7.3.3 氯胺�睺�蠶７蚴約練從Α�—顯示總蛋白
7.3.4 固綠染色法——顯示總蛋白質或堿性蛋白
7.3.5 偶聯四唑反應——顯示含色氨酸、組氨酸和酪氨酸的蛋白質
7.3.6 重氮化偶聯反應——顯示含酪氨酸蛋白質
7.3.7 Sakagushi反應——顯示含精氨酸蛋白質
7.3.8 對二甲氨基苯甲醛反應——顯示含色氨酸蛋白質
7.3.9 鐵氰化鐵法——顯示蛋白質—SH基
7.3.10 汞橙（RSR）法——顯示蛋白質—SH基
7.3.11 巰基乙酸�蔡�氰化鐵法——顯示蛋白質—SS基
7.3.12 過甲酸�蠶７蚴約練從Α�—顯示—SS基蛋白質
7.3.13 過甲酸�睞lcian藍法
7.4 核酸的顯微測定
7.4.1 孚爾根反應——顯示DNA
7.4.2 甲基綠�纔陝迥�（焦寜）染色法——顯示DNA與RNA
7.4.3 蘇木精色法
7.4.4 鐵礬�菜漳揪�染色
7.5 酶的顯微測定
7.5.1 聯苯胺反應——顯示過氧化物酶
7.5.2 氯化三苯四氮唑（TTC）法——顯示脫氧酶
7.5.3 四氮唑鹽反應——顯示琥珀酸脫氫酶
7.5.4 Nadi反應——顯示細胞色素氯化酶
7.5.5 鉛沉澱法——顯示酸性磷酸酶
7.5.6 鈣�差艸戀矸ā�—顯示堿性磷酸酶
7.5.7 鉛沉澱法
7.5.8 鈣皂沉澱法——顯示酯酶
7.5.9 靛藍法——顯示酯酶
7.5.10 鄰苯二酚法——顯示多酚氧化酶
7.6 細胞壁成分顯微測定
7.6.1 縴維素測定
7.6.2 木質素測定
7.6.3 角質、栓質測定
7.6.4 果膠質測定
7.7 活體染色
7.7.1 綫粒體活體染色
7.7.2 液泡活體染色
8 其它切片技術
8.1 徒手切片
8.1.1 徒手切片法的應用及優缺點
8.1.2 徒手切片操作過程
8.1.3 過程小結
8.2 滑走切片
8.2.1 滑走切片方法和步驟
8.2.2 材料的軟化處理方法
8.3 蒸汽切片
8.4 冰凍切片
8.4.1 冰凍的原理
8.4.2 利用專用冰凍切片機和乾冰進行切片
8.4.3 切片過程
8.4.4 半導體式冷凍切片機
8.4.5 恒冷箱式冷凍切片機
8.5 木材切片
8.5.1 直接切片
8.5.2 包埋切片
第三篇 顯微鏡與顯微技術
9 顯微鏡簡介
9.1 顯微鏡分類
9.2 顯微鏡基本原理
9.2.1 透鏡成像的基本知識
9.2.2 顯微鏡光學係統成像
9.3 顯微鏡光學技術參數
9.3.1 透鏡分辨率
9.3.2 分辨極限與放大率
9.3.3 景深
9.3.4 焦距和角孔徑
9.3.5 色差
9.3.6 齊焦距
9.3.7 同軸度
9.3.8 覆蓋差
9.3.9 工作距離
9.3.10 鏡像亮度
10 常用顯微鏡
10.1 正置顯微鏡
10.1.1 機械部分
10.1.2 光學部分
10.1.3 照明係統
10.1.4 顯微鏡維護與保養
10.2 倒置顯微鏡
10.2.1 倒置顯微鏡簡介
10.2.2 Olympus�瞂I 71倒置顯微鏡
10.2.3 透射光明場觀察步驟
10.2.4 相襯觀察（使用IX2�睮LL100照明柱）
10.2.5 微分乾涉襯（DIC）觀察（使用IX2-ILL100照明柱）
10.2.6 簡易偏光觀察（使用IX2-ILL100照明柱）
10.3 體視顯微鏡的原理、結構與使用
10.3.1 體視鏡光路
10.3.2 普通變焦體視鏡
10.3.3 Olympus SZX16型解剖鏡
10.4 熒光顯微鏡
10.4.1 熒光原理
10.4.2 熒光顯微鏡原理
10.4.3 熒光顯微鏡結構
10.4.4 熒光顯微鏡使用
11 顯微圖像捕獲及處理
11.1 顯微圖像捕獲
11.1.1 顯微圖像捕獲
11.1.2 Olympus DP71圖像捕獲係統
11.2 圖像處理
11.2.1 圖像數字化
11.2.2 位圖的有關術語
11.3 Image-Pro Plus圖像處理軟件
11.3.1 Image-Pro Plus窗口
11.3.2 Image-Pro Plus操作
附錄
參考文獻

精彩書摘

人類對於植物的研究發展至今，己從對於植物整體、根、莖、葉、花、果實等宏觀形態、器官的觀察、研究，經過植物的組織、細胞水平的研究，發展至現代分子水平的研究。對於組織、細胞及更深入的結構層次，絕大部分自然狀態的植物材料並不能夠直接用於研究操作、進一步的微觀研究。要對植物微觀結構進行研究（器官解剖觀察、花芽分化、授粉受精、貯藏營養規則、染色體觀察等），就必須將原先體積大、透明性差的植物材料進行特殊的處理，使其體積變小、厚度變薄、透光性增強而能夠有可能用於顯微觀察。在進行顯微觀察時，如何區分生活或死亡的組織與細胞的不同顯微結構（如細胞壁、細胞膜、細胞核、細胞質、各類細胞器、染色體）、同一顯微結構的不同組成成分（縴維素、果膠、蛋白質、糖類等）以及如何對某一具體的結構、成分進行特定觀察，則需要對樣品材料進行不同的染色處理，使各結構、成分吸附特定染料或發生化學反應而呈現不同顔色，進行區分。
植物製片就是要將較大的、不透明的、難於進行顯微觀察的植物材料進行各種特定處理，使其成為可以在顯微境下觀察的、小而薄、完整透明、可明顯區分不同結構和成分而又保持原先結構、狀態的實驗材料。
……

前言/序言

《植物細胞與組織的研究方法》是一門理論與實踐緊密結閤的實驗生物學課程。隨著生命科學的發展以及學科間的交叉與滲透，植物細胞與組織的研究不僅是經典植物學研究的必備技術，而且已成為現代遺傳學、現代園藝學、分子生物學、植物與微生物分子互作等研究的重要技術。為瞭探索積纍經驗，近年來在學校生命科學學院和研究生處的支持下，我們對該課程的教學體係、教學條件、教學內容和教學方法等做瞭相應的調整、補充和改革，以全麵提高研究生的實踐教學、幫助學生在理解實驗原理的基礎上熟練掌握關鍵技術，培養學生綜閤分析能力。由於形成新的教學體係和教學內容，不少師生都嚮研究生處反映，希望編寫一本既全麵而又實用的研究工具書。為瞭滿足這一要求，我們聘請瞭在該領域研究上有豐富實踐經驗的專傢撰寫瞭這本研究生教材。
《植物細胞與組織的研究方法》在內容上既反映瞭顯微技術的較新成就，又注重切閤當前教學實際需要。書中第一篇介紹植物細胞與組織研究特彆是植物製片的基本原理，從製片原理、製片過程、染色原理、染色過程等全方位進行詳細的闡明。第二篇介紹常用的植物製片技術，既包括傳統的切片技術（如石蠟切片、徒手切片、半薄切片等）、非切片技術（塗壓製片、整體製片、透明製片、離析製片等），同時又介紹瞭植物顯微化學相關原理、技術［如細胞壁成分顯示與測定、蛋白質顯示與測定、脂類顯示與測定、核酸（DNA）顯示與測定、糖類染色與測定等］。本書還簡要介紹瞭部分現代植物生理學、遺傳學等相關領域的部分研究技術，如細胞器（葉綠體、綫粒體、液泡）分離、染色、觀察技術、DNA顯色分析技術等。
對於顯微觀察、攝影方麵，本書著重介紹常用的正置顯微鏡、倒置顯微鏡、體視顯微鏡、熒光顯微鏡等顯微鏡的基礎原理、鏡體結構、使用操作等。介紹圖像捕獲原理及顯微拍攝軟件的使用、顯微圖像的基本處理、數據測定。
《植物細胞與組織的研究方法》內容豐富，匯集瞭經典植物細胞學、細胞生物學及植物細胞工程中多種常用的研究方法，可供農林院校的相關專業研究生和科學工作者參考。
由於編者水平有限，書中難免有疏漏之處，敬請廣大讀者指正批評。
編者
2010年8月

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